克隆感受态细胞
产品规格（CAT#: DL3044）
Ecn 1917 ldhA： 100μl/支
pUC19 (control vector，10pg/μl): 10μl
保存条件(保质期)： -80℃（6个月）
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产品名称 |
产品货号 |
产品规格 |
说明书下载 |
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Ecn 1917 ldhA 感受态细胞 |
DL3044S |
10×100ul |
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| DL3044M | 50×100ul |
基因型
Ecn 1917 ldhA O6:K5:H1 EndA+ Dcm+
产品说明
大肠杆菌菌株Nissle 1917是一种非致病的共生大肠杆菌分离物，1917年由德国微生物学家Alfred Nissle 从一名未感染痢疾的士兵肠道中分离出一株大肠杆菌，这个菌株可以作为药物治疗其他感染者，后来被命名为Nissle 1917，通常也缩写为EcN。EcN是一株未经过改造的野生型大肠杆菌菌株，不产生任何肠毒素或细胞毒素（肠毒素是由某些微生物产生的毒素，可引起胃肠道症状）。本公司的Ecn 1917 ldhA菌株来源于Mutaflor的EcN 1917，将Ecn 1917基因组中的ldhA基因敲除，即是Ecn 1917 ldhA；Ecn 1917 ldhA（乳酸脱氢酶缺失的大肠杆菌Nissle 1917）是一种通过代谢工程改造的益生菌株。它的核心作用是阻断乳酸合成通路，重构菌株的代谢流向。 乳酸脱氢酶（由 ldhA 基因编码）是负责将丙酮酸转化为乳酸的关键酶。敲除 ldhA 基因后，菌株无法再积累乳酸，导致代谢通量发生重定向：一，碳流转向：原本流向乳酸的碳被导向其他代谢分支，如乙酰辅酶A、琥珀酸等。二，减少副产物积累：在许多发酵工程中，乳酸被视为非目标副产物，敲除 ldhA 有助于提高目标产物的纯度和得率。Ecn 1917 ldhA 是优秀的底盘菌株，尤其适合需要精确控制代谢流向、减少副产物积累、优化目标产物产量的试验，常用于开发治疗代谢性疾病的活体生物药。通过其代谢能力，使其在肠道内持续生产并输送特定短链脂肪酸（如丁酸、丙酸等），用于治疗炎症性肠病、心血管疾病等。Ecn 1917 ldhA胞内含有两个野生型辅助质粒pMUT1(3173bp)、pMUT2(5514bp)，这两个质粒无已知功能，无明显的筛选标记，但在大肠杆菌中可稳定存在，可作为EcN菌株的鉴定标准质粒使用，也可作为EcN菌株的加工平台，对pMUT1、pMUT2进行加工改造可连入外源基因，可表达蛋白或引入外源小RNA分子等。EcN菌株核酸酶endA1为野生型，体内核酸酶含量较高，提取质粒时务必使用质粒提取试剂盒中去蛋白液尽量去除核酸酶对质粒的污染，防止质粒降解；另外染色体中携带有功能的Dcm甲基化酶；不可用于蓝、白斑筛选。Ecn 1917 ldhA感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒（2686bp，AmpR）检测转化效率>1×107 cfu/μg DNA。
操作方法
1. Ecn 1917 ldhA感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的质粒，并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心1分钟收集菌体，留取100 μl左右上清重悬菌块并涂布到含相应抗生素的LB培养基上。
5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
Ecn 1917 ldhA 菌株在癌症治疗中的作用
肿瘤微环境中会积累大量乳酸，这些乳酸会抑制免疫细胞的活性，帮助肿瘤逃避免疫攻击。Ecn 1917 ldhA可以作为底盘菌构建清除肿瘤内乳酸的目标菌株，可以逆转免疫抑制状态，增强机体自身的抗肿瘤免疫反应。
质粒信息
pMUT1(3173bp)质粒序列：
GCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTTGGTATCTCGGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTAACGCCACTGGCAACGGCCACTGGTAAGCAGGATGTGCGAGAGATGTAACGAGAGTTCTTGAAGTGGCGGCCTAACTGAGGCTACACTGAAAGGACAGTATTTGGTGACATGTCTCGCACAAGACTGTTACCACGGTTAGAGAATCTGCCAGGATTAACTAACCTTCGAAAAACCACCTGCCAGGGTGGTTTTTTCGTTTTTACAATAGTGAGATTACGACGAGACTGAATGAATCTCAAGATTTCATTTAGCCTGCCGCTCGATCATTCAAAGTTTTGAGGTAGCTTCATTGGGTCATGGTATCCAAGCTCTAAAAGCTTTATATGGTTCGGTGTCAGCCGCTGGAAATGAATAACCCAGTCAGAAACCTTGTATTTCCCATGAAACGTATCTTTAAAAACCGGATCGCCTAAATGAGCATGCCATAATTTGTTAGCTCTAGCATACTTCTCAATAGCTTCTTTGTTTTCGTAATGATCAGGCACTTTCCACGATGGCGATACTTTGCCAGTCCAAGCTGGATATCCTTTTAAAGGATCGCCAAAGAGATTGTATTTTTCAAAATGCTCAATGAAATCATCGATTTTATCGAGTGTTTTTGCAGAATATCTGGATGTGTAATAAAGGTTGAAGGTCTCAGAGAATGAGACAATATTCAATTGTGGATTTTGCGCGCCTGCTCCGCTGCCCATGCTCTTCTCTGCTCCCGACTTAGACCAGATGGCATTGTAACAGACTTCTCATTCGCTCTGGAAATCAACAGAGACAAGGATACGCCAAAAACCTCAATATCTTTAACAAGATCATGACGTTGTTCGGTTTTCATATCGCTAACTCCGTATCTAATTCAGGCAGGAAAAAATCTTTTCCTCGTTTTCAGAGTAGTCTTTTTTGGTTGCACAATAATGGCGCCAGTGTCACCCTATTCATATGAATATACCATATAATATATACTTTAAATATTTTGGGGCTTAGGAAAATCAATGACTTACTCCGTTAAGAATAAATGGAAAGCTGGCGGTTTGTCTCTTGGCTGGACAGCAGTGCCTACCGTATTGTTTTTTATACAAAACGAGAAAAAGCTAACTTCAGTGGCCTTTAACACACTACTTAACCTGATCGTTCACTGGTGGAGTTTGCAAGAGTGGCCGCATCCGTCAATGGAAAGTCTAGCCATACGTATGGGGGTTTCTGTACGGACTGTTCAGAGAGCTATCAATGATCTTGAAAAAGCTAATCTCTTGGACAAGAAACCAACATCGAAGAGTGATCGCCGATATGGTGGTCGCAATATTTATGATCTAACAAAGCTAGTTGACTACCTAGATACAATGGGTCCATCAGTAGCTGAACAAGTTAAGAAACCACGCCATAAAAAACCGGTATATACCGTAAGAAAAACGACAGCTTAAAAAAGCACAATGGAACTGAGCGCGAGCGATGCACGATAGCAAAACGATATATTACTTATTGCATTGGTCTTGGTAGCCCTGCTTCTGGCTAAACCACTGTCAGGAGTAATTGGCTTTGCCTGTAATGGGTTCATCGCTTCACAGTTAAAGTTATCGCATAGCTCATATATTTACCATAATCCCTTAATTGTACGCACCACTGAAACGCGCTGAACGCGATTCTGACGCAGACACCGCAAAAAGAGATGTTTTACCCCGGAAAAACAGGAAGGATGCGTCAGGATCGTTTTCAGCTCGCTGCATAGCTATGCATGAAAGCGAATGGTGATCACTTTGGGAGCTTACGGTGTTCATACCGTCAGTTTTCGACAGTTTTCTCTCCGGGAAGCTAATCTGCCATAAGCCTGGATAACAGGGCACGGTGATACTCCGTAATAGCGATCAGCACCTCCGCATACTCCCTGTCCCCGACACGCTTGCCGTCGATAAAGAGTTTTTTCTGTAACGCCCCCAGTCTCATAACTTCTTTCAGTACCCGATCATCAGTCAGTGAGTTAACTTTCTTACCGAGAGCTGCCGCCCGTAAAAAACCGGAAACGGTCTTGCCGCATTCAGCAGCCCTTTTTCTGATTTCCTGGTCTTCTTCTGCCGTCAGACGAACAGGGCGACTGATAGCCCGCCTGCGCGTATTACTTCCACTTCGTTTTGTCATAAAACATGGCTCCGTATCTGACATGGGTGTCGGGGCAAAGCCCTGACCAGGGCAATTGTAATAGCGTGCATGTATGCGCGGTATAACAATTGCACATCCTGTCCTGTCAGCAAGCTCGAATTACCGACAAAGGCACGGCAGTTTTTTGGCAGTGACAGTGTTGTCTGACAGAAATGCCCGTCAAAAAGCCAAGCGGCAGAATAGCGGCAGCAAAACAGTCGAAAAGTGGTACGCGATATAATCACACAACGCAGATGACAGACAGAACGGAGAAAACGAAAAGATGAATAAGCAGCAGCAAGCCGTACTCAACATGGCGGGATTCATAAAAAGTCAGAGCCTGACGCTGCTCGAAAAACTGGACGCACTCAATGCCGACGAACAGGCCGCCATGTGTGAGAAACTGCACGAACTCGCAGAAGAACTCCAGAACAGCATACAGACACGCTTTGAAGCGGAAAATCTTACCGGGATATAACGCATCCGGACAGGATGCAGAACGGCATAGAGGAGCGTAAGGAGAAAATGTCACATAAGGCGCTCTTCCGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTACGCTCGGTCGTTCGACTGCGGCGAGCGGTGTCAGCTCACTCAAAGGCGGTAATACGGTTATCCACAGAATCGGGGGATAAAACCGGAAAGAACATGTGAGCAAAAGACAAAGACCCAGAAGAAGGGCGCGCGGGAGGCGTTTTTCCATAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTG
pMUT2(5514bp)质粒序列：
GTGATGGCAATGAAAATATCCCAATTGTTGATTTTGACAGTGTGGATCTAATATCAAAAGTTGACTCAATCATTTTCGTTTTGAGTAAGAATAATGACGACAATTGTATAACCATATACAAGAAGCAATATCCAGTTCAAAACTTATCAAGAAAGAAAAATAATTTTTATGGGTTTAGCAAAAAAGAACTATCTCGAGTAGATCAAGATATGATTTCTATTGATGGTAAGGCATCTCTTGTTTTTGCTGGCGATACGGTATTTATCTACGACCAAAATGTTTTCGAGCGTTTTTTTGGCTATAAAGCATGGATAAAAAATGCTGCCACTGATTTTGTTAACAATATGTCCACTCGTTTTAAGGGATTTGTTGACTTAAGCAAATTTATTGAGCGAGTAAATAAAGATAGTCATGATGCGGATGCTTTTTCTCGGAAGCTAGCTAAGGCGTATGCTCGAAGCGAAACAAAGCAAACGCTACAAACAATAACAAATGAACATCTTAAGAGTGTTCTAGATGAAAATGGATATTTAGCAGGTGTTTTAAAGTATAAAAAAGGTGATGCTACGATTTGCATCGCAAGCCATAACCAGCAAGATACGTTTATCGCTATGGTATCCGAAGGCGTATTGAGATCGTTGATTACAGGCATTGATTATTTAAGCCTTGGGTCAAAGCGGAAAATATCGTCAGCAGCATCCAATACTACTACCAGTACCACTTCGGATTCCTCTTCCGCTGCCGTGTGAGACAAAACAACCTATATCAGATAACAGCCCTGCTTTTGCGGGGCTTTTTGTTTGTGCGTGATGCGACCTCGATGTACGATAGATGCTGTACTAAGCCAGTACACACAGCGTCCCCTCTTCGAGGTGCCGTCTGTGACTGTTTCAGGGGGCTCGCCGCCCCCCGAAACCCCTTGCATCCACTGCGAAAATTCGCACTTTGGGTGCGAAACTTTCTCAGCGGATTCTCATGGAAAAGCGCACCAAAGAGATCAAAATCAGACTCACCGAAGCGGAGCATCAGCGGCTACTTGAACGCTGTGACCGTAAGCATTTGGCCGAGTGGTTACGAGCCGTTGGCTTAGGCGAATCGCGTACAGCTCGGCGTCGTCCGCTACCTACCGTAGACCCGACCTTGTTACGTCAGGTCAGCGGGATCGGTAATAACCTCAATCAAATAGCCCGTTACTTGAATCAGCATGGCTTACCGCCGCAAGAACGGGTGTCGTTGTTAGCGGTGCTCAATAGCATTGACCAACATCTTGCCGAACTGCTGGAGCAACATCGTGATCGTTAAGATTCATGGTCGTGGTGCCGGTGGCGGGAGTGGTCCTGTCGATTACCTTCTGGGCCCTGATCGTCAGCGCGAACAAGCGACGGTGTTACGGGGTAACCCTGAGCACGTCAAAGAGCTGATTGATGGCTGCGAATTTGCCCGAACTTATACCTCTGGCGTGCTCTCTTTTCAGGAGAGTGATTTACCCGAAGGCGAAAAGCAGCGATTGATGGATGAATGGGAGCAGACATTGATGACCGGTCTAGATAAAGACCAGTATGCCTGCCTCTGGGTTCAACATCAGGACAAAGGGCGTCTTGAATTGAATTTTGTTATCCCGAACATCGAATTGCAGAGCGGAAAACGGCTACAACCTTACTTTGATCGGGCTGACCGGCCTCGTGTTAACGCATGGCAAACCCTCACCAATGACCGGCTTGGGTTACGCGACCCGAATGACCCTGCTAATCGCCGAGCATTAACCCCCTCTAATGACCTTCCTCGCAACAAACAGCAGGCAGCGGAAGCCATTACCAAAGGGCTAATCAGCTTGATTGAGCAGGGAGAAATTACGGATCGTAAAGGGGTGATTTCCCACCTTACCGATGCCGGATTGTCGGTCGTACGGGAAACCAAATCCAGTATCAGTATTGCTGATCCGGCAGGTGGCCCGAATATTCGCTTAAAAGGAGTGCTGTATGAGCGAGATTTTAAATTTAGCGCGGGAGTTCGAGAGCAAATCGAAGCAGCAAGCCAAGACTACCGCAACGAGCGTCGCGAACGCATTCGAGAAGCACGAGAAACGTATCACCGAGGCCTTGAAATTAAGCTCAGGGAACATACAGACCGCTATCCAAGAAGAGAACGACAGCCAGCTAAAACAGATACACCGCTTAGTCGGAATGACATGGCTGTACAGCCTGGCATTAAGTGGGATCCTGTTTGCGATATTGATTGGAGTAGCTTGGTATCTCGGGACTATCGTGGTCGAACGCCAGAACGAAATCAGCGAGCAGAGCCAGATCCTGCAGGACTTAAAGAGCCAGACCGGAGCCGGCGTATCGATAATTCACGATTCCAAGAACAAGAGCGTGTATTACCTGATCCTTCCGCAGGGGGCGAAGAAGATCGACGAGTACAAGAACGCTCAACATCGTCAGGTCATCAAGTACAGCGCCAAATAACCTCATCAGACGCCACAGAATCGATTCTGGGCGGTTTTATCTATCAGGGTGAAGAGATTCATGACCGAAATGGAGCAGCAGCTTCTGAGCGCATTAGAGAGCTTACAGAGGCACTACGAACAACAGCAGCAAGCGTGGCAGGACAGCTACGCCAACTTACAGCGCATGTTCGAGGTTACCTCGCAGGAGTTGGCGAAAAACGACAGGGTTTGTCAGGCCTTGAGCATGCAAGTCACCGGCTTGGCGCAGCAAGTCGAGAGCTTAAACAGAACAGTGCGCCGCTTGAGCAATTAGCCAAGCGGCACGAACAGCGGTATTCTCGCGGTCACGGCATGAGTTTATAAGCGTTTATCGGCCGCATCGTAAGCGGCAGAACGCTCGCGCTTACCGACCGCCACCACGAATACCGTAATGGTTTGATCGCGAACCTGATAGACCAAGCGATAACCGGATGCACGGAGCTTGATTTTGTAGCAGTCATGCAGCTCTCGCAGGCGATTTTTATCGATCCGCGGGTGTTGTAGAACCTGCTCGAGTTTTTTCTTGAACTGCAGACGGACATCATCCCCGAGCTTGCGCCATTCCTTCAGGGCTCGGGGATCAAATTCAAGGTTATAGCTCATCCAGTGACACCTTTACGCCCGCCTGTGGGTTTTCCAGACGATCCCGAACGATAGCCATCAAATCGGCATCATCCTCGGTCAGCAAAACCTGCTGGAACGGCAAACGTCCGCTTTGGGCCACATATTCCAGTGTTTGGCGCAGAACCTCGGACGGCGTTACGCCCAGCTTTTCCAGTGCGGCATAAGAGCGGCTTTTCAGCTCGTCATCGATCCGAATATTAATCGTGGCCATCATCTCACCTCTTGATGTAGTGACAAGTGTATCTACAAGAAGTAGTATGAGCGTAAAGCCGTGCGAGAACAAGCAGGAATAACGGATTGTCGGGGATGACAAAAACCGTTGTTGAGGTGTAACTTAGTGGCAGAAAAAACAAAGCCCCGAAATCATGCTCTACTTTGGCGAGCGGACATGACATTCAGGGCTAGGTCGAAACCTAGAAAGGATATTAGCACATGCAGCGTGCAAAACAACAGCCCCGCCATAAGGCTGGGAGCCTTGGATAATCAGGCTTTAACGCTTTTTAACGACCGGTTACCCCACAAGCCGTACTTCTCCGATGATTTACAGTTTGGTGTTCGCATTGCCGGTAAAGAGCGTGCTCTCCTCGCAAAATACATCCAGTTTAATCAGCCTCACGCCATGTACTGGCTTTGCTTTGACGTGGACAGAGCCGGAGCCGCGATTGATTGGGCCGATCTGGGGGCACCTGCGCCCACACTCACCATCAAAAACCCCGAGAACGGACATGCTCACCTGTTGTATGCCTTGCATACGGCGGTACGTACCGCGCCGGATGGTCGAGCTGCCCCCCTTAAATACGCCGCCGCCATCGAGAATGCGCTGCGTAAAAAATTGGGCGCAGATGCGGGGTATTCAGGGCTAATTTGCAAGAATCCGAACCACCTGCACTGGCAGATCACCGTCTGGCAGCCAGAGCTCTATACCCTTGACTGGTTAGCCGATTACCTCGACCTTGGCGCAGCCAATGACCGCGAAATCCTGCCGGACTACGGTTTAGGCCGTAACTGCACCCTCTTCGATAAAACCCGCAAGTGGGCTTACCGCGCTATCCGCCAAGGCTGGCCGCAGTATGACCAATGGCTACAAGCCTGCATTGAACGCGCTAAAGCCTACAACCTGCAGTTCTCCGCACCTTTAGACGAGAACGAAGTCATGGGAATTGCTAAAAGTGTGGCTAAGTGGACAAGTAAGAACCTTACAGAGCTTGGCTTTGAAGAGTATGTTAAACAAACACATACTTCTGAAATTCAGCGTCAACGTGGAAAAAAAAGCTCTGGTGGTGGAAGGCCGAAAGTTAGAGATGGAGAATGGATTTCTTTAGGAATAAGTAGATCAACGTGGTACAGGAAATTTTACAAAAATGAAAATTAGAATGTATCTCTTATCAATGTTGTTTTTATTTATACCGATAACAATATATTTTTCTGGTATTGATAACGTATGGTCTGTTTTAGATAAGGCCATGTCTTCGTGTTCTGGCGCGGATGGAAAATTTCAATGCGTACTCGACTATTCAAATAGCAGATTAACATTTTCTGTATTGAGGTCAGTGATCTGCGGGGCTTTGATTTTAACTTGTTCTTATACATACATTTGGTATCGATGGGTTTTGAAAAACTTAGACTCCGGTGCGGTGTCAAGAAAGTTAAAGGTCGTTTCATGTAAAAAAGAATCCGGTGAGTATCTTTCTTTTTTATCAACGTACATAATGCCGTTGGTCTTTACTGATTTAAGCAAACCATCAAATATAGTTAATTTTTTGTTTGTTTTGATTATCGTCGGTTTTTTGCACATCAAAACAAAAAGAATTCACTGCAACCCAACATTGTCATTATTTAATGTTTCTGCCTATAAGATTACTTACAGTGTGGTAGCTAATGGAAGGGAAAAAACGCAAGACGGTGAGTTGATAGTTTTATCTAAAGATTTAATAAAAGAAAATGATTTTATCAGAGTTATAAATCATGATGATTATTTAACGTTCGCGAAAAAAATCATAGAGGAATGATGATGAGTGACGATGCCTTAGATCTTGATGCTTTGGAGCATAATGAAGAAAAAGCACAAGAGCTTTTAGAACTGTATAAGCATTTTGATTGTGATATTAACGATGTTACATTGCACACTTACTTTAACTTTAAAAATAAAGGTAAAGCGGGTGCTAAGGACTCTTTTAGCTATAAAATTGCCATCCTTAAAAATGACAGTGAGCTAAAACAGTCCATTATTGATAATGTGATAAAGAAAACTATATCTGATTTAGAAAATCGGGTTGTGATAGTATCAGATGTTAATACACTAAGTGACCGCACCAACACCATTTCATTTTTAAATGATGCTGAGCAGTATGATAATGAGCAAATGAAGTTTCTGACTGGCATTGTGTTTGATGCTGGGTTTGGTG
注意事项
1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。混入目的DNA时应轻柔操作。
2. 若要获得大量，高纯度质粒，建议在TB培养基（唯地CAT#：CM1018L）中摇菌培养（以标准质粒PUC19为例：在TB营养液中过夜培养的菌体浓度和质粒产量为LB的3-4倍，SOC的2倍）。
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产品名称 |
产品货号 |
产品规格 |
说明书下载 |
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Ecn 1917 ldhA 感受态细胞 |
DL3044S |
10×100ul |
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| DL3044M | 50×100ul |
基因型
Ecn 1917 ldhA O6:K5:H1 EndA+ Dcm+
产品说明
大肠杆菌菌株Nissle 1917是一种非致病的共生大肠杆菌分离物，1917年由德国微生物学家Alfred Nissle 从一名未感染痢疾的士兵肠道中分离出一株大肠杆菌，这个菌株可以作为药物治疗其他感染者，后来被命名为Nissle 1917，通常也缩写为EcN。EcN是一株未经过改造的野生型大肠杆菌菌株，不产生任何肠毒素或细胞毒素（肠毒素是由某些微生物产生的毒素，可引起胃肠道症状）。本公司的Ecn 1917 ldhA菌株来源于Mutaflor的EcN 1917，将Ecn 1917基因组中的ldhA基因敲除，即是Ecn 1917 ldhA；Ecn 1917 ldhA（乳酸脱氢酶缺失的大肠杆菌Nissle 1917）是一种通过代谢工程改造的益生菌株。它的核心作用是阻断乳酸合成通路，重构菌株的代谢流向。 乳酸脱氢酶（由 ldhA 基因编码）是负责将丙酮酸转化为乳酸的关键酶。敲除 ldhA 基因后，菌株无法再积累乳酸，导致代谢通量发生重定向：一，碳流转向：原本流向乳酸的碳被导向其他代谢分支，如乙酰辅酶A、琥珀酸等。二，减少副产物积累：在许多发酵工程中，乳酸被视为非目标副产物，敲除 ldhA 有助于提高目标产物的纯度和得率。Ecn 1917 ldhA 是优秀的底盘菌株，尤其适合需要精确控制代谢流向、减少副产物积累、优化目标产物产量的试验，常用于开发治疗代谢性疾病的活体生物药。通过其代谢能力，使其在肠道内持续生产并输送特定短链脂肪酸（如丁酸、丙酸等），用于治疗炎症性肠病、心血管疾病等。Ecn 1917 ldhA胞内含有两个野生型辅助质粒pMUT1(3173bp)、pMUT2(5514bp)，这两个质粒无已知功能，无明显的筛选标记，但在大肠杆菌中可稳定存在，可作为EcN菌株的鉴定标准质粒使用，也可作为EcN菌株的加工平台，对pMUT1、pMUT2进行加工改造可连入外源基因，可表达蛋白或引入外源小RNA分子等。EcN菌株核酸酶endA1为野生型，体内核酸酶含量较高，提取质粒时务必使用质粒提取试剂盒中去蛋白液尽量去除核酸酶对质粒的污染，防止质粒降解；另外染色体中携带有功能的Dcm甲基化酶；不可用于蓝、白斑筛选。Ecn 1917 ldhA感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒（2686bp，AmpR）检测转化效率>1×107 cfu/μg DNA。
操作方法
1. Ecn 1917 ldhA感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的质粒，并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心1分钟收集菌体，留取100 μl左右上清重悬菌块并涂布到含相应抗生素的LB培养基上。
5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
Ecn 1917 ldhA 菌株在癌症治疗中的作用
肿瘤微环境中会积累大量乳酸，这些乳酸会抑制免疫细胞的活性，帮助肿瘤逃避免疫攻击。Ecn 1917 ldhA可以作为底盘菌构建清除肿瘤内乳酸的目标菌株，可以逆转免疫抑制状态，增强机体自身的抗肿瘤免疫反应。
质粒信息
pMUT1(3173bp)质粒序列：
GCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTTGGTATCTCGGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTAACGCCACTGGCAACGGCCACTGGTAAGCAGGATGTGCGAGAGATGTAACGAGAGTTCTTGAAGTGGCGGCCTAACTGAGGCTACACTGAAAGGACAGTATTTGGTGACATGTCTCGCACAAGACTGTTACCACGGTTAGAGAATCTGCCAGGATTAACTAACCTTCGAAAAACCACCTGCCAGGGTGGTTTTTTCGTTTTTACAATAGTGAGATTACGACGAGACTGAATGAATCTCAAGATTTCATTTAGCCTGCCGCTCGATCATTCAAAGTTTTGAGGTAGCTTCATTGGGTCATGGTATCCAAGCTCTAAAAGCTTTATATGGTTCGGTGTCAGCCGCTGGAAATGAATAACCCAGTCAGAAACCTTGTATTTCCCATGAAACGTATCTTTAAAAACCGGATCGCCTAAATGAGCATGCCATAATTTGTTAGCTCTAGCATACTTCTCAATAGCTTCTTTGTTTTCGTAATGATCAGGCACTTTCCACGATGGCGATACTTTGCCAGTCCAAGCTGGATATCCTTTTAAAGGATCGCCAAAGAGATTGTATTTTTCAAAATGCTCAATGAAATCATCGATTTTATCGAGTGTTTTTGCAGAATATCTGGATGTGTAATAAAGGTTGAAGGTCTCAGAGAATGAGACAATATTCAATTGTGGATTTTGCGCGCCTGCTCCGCTGCCCATGCTCTTCTCTGCTCCCGACTTAGACCAGATGGCATTGTAACAGACTTCTCATTCGCTCTGGAAATCAACAGAGACAAGGATACGCCAAAAACCTCAATATCTTTAACAAGATCATGACGTTGTTCGGTTTTCATATCGCTAACTCCGTATCTAATTCAGGCAGGAAAAAATCTTTTCCTCGTTTTCAGAGTAGTCTTTTTTGGTTGCACAATAATGGCGCCAGTGTCACCCTATTCATATGAATATACCATATAATATATACTTTAAATATTTTGGGGCTTAGGAAAATCAATGACTTACTCCGTTAAGAATAAATGGAAAGCTGGCGGTTTGTCTCTTGGCTGGACAGCAGTGCCTACCGTATTGTTTTTTATACAAAACGAGAAAAAGCTAACTTCAGTGGCCTTTAACACACTACTTAACCTGATCGTTCACTGGTGGAGTTTGCAAGAGTGGCCGCATCCGTCAATGGAAAGTCTAGCCATACGTATGGGGGTTTCTGTACGGACTGTTCAGAGAGCTATCAATGATCTTGAAAAAGCTAATCTCTTGGACAAGAAACCAACATCGAAGAGTGATCGCCGATATGGTGGTCGCAATATTTATGATCTAACAAAGCTAGTTGACTACCTAGATACAATGGGTCCATCAGTAGCTGAACAAGTTAAGAAACCACGCCATAAAAAACCGGTATATACCGTAAGAAAAACGACAGCTTAAAAAAGCACAATGGAACTGAGCGCGAGCGATGCACGATAGCAAAACGATATATTACTTATTGCATTGGTCTTGGTAGCCCTGCTTCTGGCTAAACCACTGTCAGGAGTAATTGGCTTTGCCTGTAATGGGTTCATCGCTTCACAGTTAAAGTTATCGCATAGCTCATATATTTACCATAATCCCTTAATTGTACGCACCACTGAAACGCGCTGAACGCGATTCTGACGCAGACACCGCAAAAAGAGATGTTTTACCCCGGAAAAACAGGAAGGATGCGTCAGGATCGTTTTCAGCTCGCTGCATAGCTATGCATGAAAGCGAATGGTGATCACTTTGGGAGCTTACGGTGTTCATACCGTCAGTTTTCGACAGTTTTCTCTCCGGGAAGCTAATCTGCCATAAGCCTGGATAACAGGGCACGGTGATACTCCGTAATAGCGATCAGCACCTCCGCATACTCCCTGTCCCCGACACGCTTGCCGTCGATAAAGAGTTTTTTCTGTAACGCCCCCAGTCTCATAACTTCTTTCAGTACCCGATCATCAGTCAGTGAGTTAACTTTCTTACCGAGAGCTGCCGCCCGTAAAAAACCGGAAACGGTCTTGCCGCATTCAGCAGCCCTTTTTCTGATTTCCTGGTCTTCTTCTGCCGTCAGACGAACAGGGCGACTGATAGCCCGCCTGCGCGTATTACTTCCACTTCGTTTTGTCATAAAACATGGCTCCGTATCTGACATGGGTGTCGGGGCAAAGCCCTGACCAGGGCAATTGTAATAGCGTGCATGTATGCGCGGTATAACAATTGCACATCCTGTCCTGTCAGCAAGCTCGAATTACCGACAAAGGCACGGCAGTTTTTTGGCAGTGACAGTGTTGTCTGACAGAAATGCCCGTCAAAAAGCCAAGCGGCAGAATAGCGGCAGCAAAACAGTCGAAAAGTGGTACGCGATATAATCACACAACGCAGATGACAGACAGAACGGAGAAAACGAAAAGATGAATAAGCAGCAGCAAGCCGTACTCAACATGGCGGGATTCATAAAAAGTCAGAGCCTGACGCTGCTCGAAAAACTGGACGCACTCAATGCCGACGAACAGGCCGCCATGTGTGAGAAACTGCACGAACTCGCAGAAGAACTCCAGAACAGCATACAGACACGCTTTGAAGCGGAAAATCTTACCGGGATATAACGCATCCGGACAGGATGCAGAACGGCATAGAGGAGCGTAAGGAGAAAATGTCACATAAGGCGCTCTTCCGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTACGCTCGGTCGTTCGACTGCGGCGAGCGGTGTCAGCTCACTCAAAGGCGGTAATACGGTTATCCACAGAATCGGGGGATAAAACCGGAAAGAACATGTGAGCAAAAGACAAAGACCCAGAAGAAGGGCGCGCGGGAGGCGTTTTTCCATAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTG
pMUT2(5514bp)质粒序列：
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AACGCAAGACGGTGAGTTGATAGTTTTATCTAAAGATTTAATAAAAGAAAATGATTTTATCAGAGTTATAAATCATGATGATTATTTAACGTTCGCGAAAAAAATCATAGAGGAATGATGATGAGTGACGATGCCTTAGATCTTGATGCTTTGGAGCATAATGAAGAAAAAGCACAAGAGCTTTTAGAACTGTATAAGCATTTTGATTGTGATATTAACGATGTTACATTGCACACTTACTTTAACTTTAAAAATAAAGGTAAAGCGGGTGCTAAGGACTCTTTTAGCTATAAAATTGCCATCCTTAAAAATGACAGTGAGCTAAAACAGTCCATTATTGATAATGTGATAAAGAAAACTATATCTGATTTAGAAAATCGGGTTGTGATAGTATCAGATGTTAATACACTAAGTGACCGCACCAACACCATTTCATTTTTAAATGATGCTGAGCAGTATGATAATGAGCAAATGAAGTTTCTGACTGGCATTGTGTTTGATGCTGGGTTTGGTG
注意事项
1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。混入目的DNA时应轻柔操作。
2. 若要获得大量，高纯度质粒，建议在TB培养基（唯地CAT#：CM1018L）中摇菌培养（以标准质粒PUC19为例：在TB营养液中过夜培养的菌体浓度和质粒产量为LB的3-4倍，SOC的2倍）。
