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W303-1A二代甘油菌种	Bsa-1180	400ul/1支

基因型

MATa can1-100 ade2-1 his3-11,15 leu2-3,112 trp1-1 ura3-1

产品说明

W303 系列是由 Rodney Rothstein 实验室在20世纪80年代通过S288C和A364A的杂交构建而成的，目的是创建一套遗传背景清晰、携带多个常用选择标记、且适合进行遗传学操作（尤其是基因敲除和互补）的菌株系列。通过杂交和孢子分离，获得了具有不同交配型的同基因型单倍体菌株：W303-1A: MATa (a 交配型单倍体)和W303-1B: MATα (α 交配型单倍体)以及相应的二倍体 W303。W303-1A是一个遗传背景经典、携带多个重要突变（尤其是 ade2-1 和隐含的 rad5-535）的单倍体实验室酵母菌株，主要用于以下领域的研究：1. 遗传学操作和分析；2. 研究DNA 修复、复制压力响应和基因组稳定性的不可或缺的标准模型；W303-1A被发现对DNA 损伤剂（如 UV, MMS, 羟基脲 HU）异常敏感，这后来被追溯到其携带的一个隐性突变**rad5-535** (有时在基因型中不会明确列出，但存在于其 A364A 祖先血统中)，RAD5 是 DNA 损伤耐受途径（模板转换）的关键基因。这种内在的 DNA 修复缺陷使得W303成为研究DNA损伤应答、复制压力、修复途径和基因组不稳定性的极其重要和独特的模型；3. 进行细胞周期、染色体生物学等基础细胞过程研究的常用工具；由于其清晰的遗传背景和易于操作，W303 被广泛用于研究细胞周期调控、染色体分离、纺锤体组装检查点、端粒维持等基本细胞过程。W303-1A菌株的筛选标记为：leu2，ura3，trp1, his3，可配合诱导型质粒pYES2、pESC -LEU/URA/TRP/HIS或组成型表达质粒 pGADT7等使用。本产品为二代甘油菌株(一代种扩增两个世代后保种)，未经过大量扩繁，核DNA及表型稳定，菌落表型及生长曲线与原种匹配度大于99.5%。

操作方法

1，客户收到菌株后，不可直接吸取菌液接种扩繁。应先对菌种进行复壮，待长出单菌落后挑单菌落接菌扩繁；复壮方法如下：在超净台打开盖子，用接种环沾取少量甘油菌液采用交叉划线法（图1）在YPDA平板表面轻轻划线(注意：不要刺破培养基)，将平板封口后放30度培养3-5天，即可长出单菌落。

2，交叉划线法：划线的目的是经过几次不连续划线达到梯度稀释菌液的效果，保证能长出单菌落。具体步骤如下：

A，-80度取出的甘油菌应在超净台打开盖子，立即在表面挑取菌液/菌块划线，不用等融化后划线，固体状态时即可用接种环挑取划线，操作要点是“快速操作，立即划线”，目的是最大限度减少温度波动对菌种造成的“冷休克”和冰晶物理损伤；如果收到的是液体甘油菌，可直接划线，在超净台打开盖子用接种环沾取少量甘油菌液划线。

B，取出无菌接种环，注意不要污染，图1所示为标准的五段交叉划线法，分五个区，每个区划三条直线，第1、2区可共用一个接种环，划好1，2区后换一个新接种环划第3区，再换一个新接种环划第4区，再换一个新接种环划第5区，每一次换接种环划线要经过前面划线区的划线痕迹，这样就相当于对菌种进行稀释。简易划线也可只划3个区或4个区。          

C，客户也可用金属接种环灼烧后划线；本公司提供的接种环为ABS材质，不可灼烧。  

图1. 五段交叉划线法示意图

注意事项

1，客户收到二代甘油菌株后，应立即放-80度保存，不可放-20度保存。

2，应减少甘油菌冻融的次数，冻融的次数越多，菌种的活力越低；

3，若扩繁菌种，注意一次扩繁不要超过四个世代，以保证菌种基因组的稳定；扩增后重新保存的菌种必须对菌种做表型、功能验证，所有表型、功能保持完好的菌株才能作为菌种使用。