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CEN.PK2-1C二代甘油菌种	Bsa-1150	400ul/1支

基因型

MATa his3D1 leu2-3_112 ura3-52 trp1-289 MAL2-8c SUC2

产品说明

CEN.PK2-1C属于著名的CEN.PK 系列酿酒酵母菌株，这个系列是由荷兰代尔夫特理工大学的Jack T. Pronk 教授实验室主导开发的，旨在创建一套遗传背景清晰、生理特性优良、适合进行代谢工程和生理学研究的标准实验室菌株，以弥补当时常用菌株S288C、BY4741等在某些生理特性（如生长速率、糖酵解、对营养限制的响应）上的不足。CEN.PK 系列的祖先菌株复杂，可以追溯到工业菌株和实验室菌株的杂交组合，主要贡献者包括：荷兰酵母菌种保藏中心 (CBS) 保藏的CBS 6412（一个用于烘焙或酿造的菌株）及实验室菌株：FL100（一个常用于基础研究的菌株），通过一系列精心设计的杂交、孢子分离和选择步骤，最终建立了具有不同交配型和营养缺陷型的同基因型菌株组合，包括 CEN.PK113（MATa）、CEN.PK2-1C (MATa)、CEN.PK122 (MATa/α 二倍体) 等。CEN.PK2-1C菌株的筛选标记为：leu2，ura3，trp1, his3，可配合诱导型质粒pYES2、pESC-LEU/URA/TRP/HIS或组成型表达质粒 pGADT7等使用。本产品为二代甘油菌株(一代种扩增两个世代后保种)，未经过大量扩繁，核DNA及表型稳定，菌落表型及生长曲线与原种匹配度大于99.5%。

操作方法

1，客户收到菌株后，不可直接吸取菌液接种扩繁。应先对菌种进行复壮，待长出单菌落后挑单菌落接菌扩繁；复壮方法如下：在超净台打开盖子，用接种环沾取少量甘油菌液采用交叉划线法（图1）在YPDA平板表面轻轻划线(注意：不要刺破培养基)，将平板封口后放30度培养3-5天，即可长出单菌落。

2，交叉划线法：划线的目的是经过几次不连续划线达到梯度稀释菌液的效果，保证能长出单菌落。具体步骤如下：

A，-80度取出的甘油菌应在超净台打开盖子，立即在表面挑取菌液/菌块划线，不用等融化后划线，固体状态时即可用接种环挑取划线，操作要点是“快速操作，立即划线”，目的是最大限度减少温度波动对菌种造成的“冷休克”和冰晶物理损伤；如果收到的是液体甘油菌，可直接划线，在超净台打开盖子用接种环沾取少量甘油菌液划线。

B，取出无菌接种环，注意不要污染，图1所示为标准的五段交叉划线法，分五个区，每个区划三条直线，第1、2区可共用一个接种环，划好1，2区后换一个新接种环划第3区，再换一个新接种环划第4区，再换一个新接种环划第5区，每一次换接种环划线要经过前面划线区的划线痕迹，这样就相当于对菌种进行稀释。简易划线也可只划3个区或4个区。          

C，客户也可用金属接种环灼烧后划线；本公司提供的接种环为ABS材质，不可灼烧。  

图1. 五段交叉划线法示意图

注意事项

1，客户收到二代甘油菌株后，应立即放-80度保存，不可放-20度保存。

2，应减少甘油菌冻融的次数，冻融的次数越多，菌种的活力越低；

3，若扩繁菌种，注意一次扩繁不要超过四个世代，以保证菌种基因组的稳定；扩增后重新保存的菌种必须对菌种做表型、功能验证，所有表型、功能保持完好的菌株才能作为菌种使用。