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YTK12二代甘油菌种	Bsa-1170	400ul/1支

基因型

MATa, trp1-1,ade2-101, his3, ura3-1, suc2

产品说明

YTK12菌株是一个蔗糖转化酶(SUC2)缺陷型酿酒酵母。酵母蔗糖转化酶(SUC2)可将蔗糖或棉子糖水解成葡萄糖和果糖；参与碳水化合物分解代谢；可以两种不同的形式定位于细胞质并分泌到细胞外起作用，该基因的N端有一个外分泌信号肽，这个信号肽引导蔗糖转化酶分泌到细胞外起作用。YTK12菌株中的SUC2基因被突变，无法合成蔗糖转化酶，通过酵母质粒：pSUC2 载体引入一个有功能的蔗糖转化酶基因，但是pSUC2 空载体的N端信号肽被切除，无法分泌到胞外，把不同的待验证的多肽连接到SUC2蛋白的N端就可以验证连入的多肽是否有分泌功能。YTK12 酵母菌株为 SUC2基因缺陷型菌种，无法在以棉子糖为单一碳源的YPRAA 培养基上正常生长。只有将具有分泌活性的信号肽序列连接在 pSUC2 载体蔗糖酶基因SUC2的 N 端，转化入 YTK12 酵母菌株中，才能使蔗糖转化酶正常分泌，YTK12 酵母才能将棉子糖转化为葡萄糖，在 YPRAA 培养基上正常生长(Jacobs et al 1997，Oh et al 2009)。另外，蔗糖转化酶(SUC2)的水解产物葡萄糖可以将 2,3,5-三苯基四唑氯(TTC)还原为不溶的红色物质1,3,5-三苯基甲酸(TPF)，通过显色反应也可以判断待验证多肽是否有分泌功能。YTK12菌株筛选标记(Transformation marker)为：trp1，his3，ura3。本产品为二代甘油菌株(一代种扩增两个世代后保种)，未经过大量扩繁，核DNA及表型稳定，菌落表型及生长曲线与原种匹配度大于99.5%。

操作方法

1，客户收到菌株后，不可直接吸取菌液接种扩繁。应先对菌种进行复壮，待长出单菌落后挑单菌落接菌扩繁；复壮方法如下：在超净台打开盖子，用接种环沾取少量甘油菌液采用交叉划线法（图1）在YPDA平板表面轻轻划线(注意：不要刺破培养基)，将平板封口后放30度培养3-5天，即可长出单菌落。

2，交叉划线法：划线的目的是经过几次不连续划线达到梯度稀释菌液的效果，保证能长出单菌落。具体步骤如下：

A，-80度取出的甘油菌应在超净台打开盖子，立即在表面挑取菌液/菌块划线，不用等融化后划线，固体状态时即可用接种环挑取划线，操作要点是“快速操作，立即划线”，目的是最大限度减少温度波动对菌种造成的“冷休克”和冰晶物理损伤；如果收到的是液体甘油菌，可直接划线，在超净台打开盖子用接种环沾取少量甘油菌液划线。

B，取出无菌接种环，注意不要污染，图1所示为标准的五段交叉划线法，分五个区，每个区划三条直线，第1、2区可共用一个接种环，划好1，2区后换一个新接种环划第3区，再换一个新接种环划第4区，再换一个新接种环划第5区，每一次换接种环划线要经过前面划线区的划线痕迹，这样就相当于对菌种进行稀释。简易划线也可只划3个区或4个区。          

C，客户也可用金属接种环灼烧后划线；本公司提供的接种环为ABS材质，不可灼烧。  

图1. 五段交叉划线法示意图

注意事项

1，客户收到二代甘油菌株后，应立即放-80度保存，不可放-20度保存。

2，应减少甘油菌冻融的次数，冻融的次数越多，菌种的活力越低；

3，若扩繁菌种，注意一次扩繁不要超过四个世代，以保证菌种基因组的稳定；扩增后重新保存的菌种必须对菌种做表型、功能验证，所有表型、功能保持完好的菌株才能作为菌种使用。