产品名称	产品货号	规格	说明书下载
EBY.VW4000二代甘油菌种	Bsa-1140	400ul/1支

基因型

CEN.PK2-1C, MATa, hxt13Δ::loxP, hxt15ΔloxP, hxt16Δ::loxP, hxt14Δ::loxP, hxt12Δ::loxP, hxt9Δ::loxP, hxt11Δ::loxP, hx10Δ::loxP, hxt8Δ::loxP, hxt4-1-5Δ::loxP, hxt2Δ::loxP, hxt3-6-7Δ::loxP, gal2Δ::(ura3/FOA), stl1Δ::loxP, agt1Δ::loxP, mph2(ydl247w)Δ::loxP, mph3( yjr160c)Δ::loxP

产品说明

EBY.VW4000菌株来源于CEN.PK2-1C酵母菌株，MATa型，Transformation marker为ura3，可用于筛选标记为URA3的质粒的转化，比如pYES2/NT、pYC2/NT、pDR196、p416GDP、pESC-URA等质粒。酿酒酵母含有大量严格控制的具有不同特征的己糖转运蛋白，这些己糖转运蛋白有转运葡萄糖的潜力，大部分酵母中含有17个己糖转运蛋白（Hexose transporter）HXT1 - HXT17，CEN.PK2-1C只含有16个己糖转运蛋白（Hexose transporter）HXT1 - HXT16；GAL2：半乳糖渗透酶基因，为半乳糖利用所必须，同时具有运输葡萄糖的功能；还有三个麦芽糖转运蛋白家族成员（Agt1、Ydl247、Yjr160）能够运输己糖；此外，STL1（Sugar Transporter-Like protein）为质膜甘油质子同向转运体，也被认为参与到葡萄糖的转运代谢过程中。为了消除CEN.PK2-1C酵母对葡萄糖的摄取能力，利用Cre/LoxP系统将HXT1 - HXT16、GAL2、AGT1、YDL247w和YJR160c这些能够运输己糖的基因，加上STL1共21个基因全部删除，即是EBY.VW4000。EBY.VW4000作为己糖转运蛋白缺陷酵母菌株，其葡萄糖的吸收和转运活性被完全消除，其他己糖的吸收和转运能力也被消除，是发现和研究天然或异源（其他物种）己糖转运蛋白的高效试验平台。EBY.VW4000不能同化葡萄糖或其他己糖作为碳源，在含有2%麦芽糖的培养基中生长正常，培养WT细胞推荐使用YPM培养基；筛选含有质粒的酵母细胞推荐使用SM培养基。本产品为二代甘油菌株(一代种扩增两个世代后保种)，未经过大量扩繁，核DNA及表型稳定，菌落表型及生长曲线与原种匹配度大于99.5%。

操作方法

1，客户收到菌株后，不可直接吸取菌液接种扩繁。应先对菌种进行复壮，待长出单菌落后挑单菌落接菌扩繁；复壮方法如下：在超净台打开盖子，用接种环沾取少量甘油菌液采用交叉划线法（图1）在YPM平板表面轻轻划线(注意：不要刺破培养基)，将平板封口后放30度培养3-5天，即可长出单菌落。

2，交叉划线法：划线的目的是经过几次不连续划线达到梯度稀释菌液的效果，保证能长出单菌落。具体步骤如下：

A，-80度取出的甘油菌应在超净台打开盖子，立即在表面挑取菌液/菌块划线，不用等融化后划线，固体状态时即可用接种环挑取划线，操作要点是“快速操作，立即划线”，目的是最大限度减少温度波动对菌种造成的“冷休克”和冰晶物理损伤；如果收到的是液体甘油菌，可直接划线，在超净台打开盖子用接种环沾取少量甘油菌液划线。

B，取出无菌接种环，注意不要污染，图1所示为标准的五段交叉划线法，分五个区，每个区划三条直线，第1、2区可共用一个接种环，划好1，2区后换一个新接种环划第3区，再换一个新接种环划第4区，再换一个新接种环划第5区，每一次换接种环划线要经过前面划线区的划线痕迹，这样就相当于对菌种进行稀释。简易划线也可只划3个区或4个区。          

C，客户也可用金属接种环灼烧后划线；本公司提供的接种环为ABS材质，不可灼烧。  

图1. 五段交叉划线法示意图

注意事项

1，客户收到二代甘油菌株后，应立即放-80度保存，不可放-20度保存。

2，应减少甘油菌冻融的次数，冻融的次数越多，菌种的活力越低；

3，若扩繁菌种，注意一次扩繁不要超过四个世代，以保证菌种基因组的稳定；扩增后重新保存的菌种必须对菌种做表型、功能验证，所有表型、功能保持完好的菌株才能作为菌种使用。