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EBY100二代甘油菌种	Bsa-1110	400ul/1支

基因型

MATa AGA1::GAL1-AGA1::URA3 ura3-52 trp1 leu2-delta200 his3-delta200 pep4::HIS3 prbd1.6R can1 GAL

产品说明

EBY100菌株是 Invitrogen公司开发的酵母展示用菌株，MATa型，与pYD1质粒配套使用，可直接转化质粒进行蛋白展示试验；Transformation marker为：leu2，trp1。EBY100-pYD1酵母展示系统通过酿酒酵母的a凝集素受体（a- agglutinin receptor）将目标蛋白展示在细胞表面，方便后期筛选。其基本原理为：a凝集素受体由AGA1和AGA2 两个亚基组成，AGA1蛋白(725个氨基酸)由EBY100细胞合成，分泌到细胞外，在细胞外基质中与酵母细胞壁的β-葡聚糖共价结合，AGA2蛋白( 69个氨基酸)可以通过两个二硫键结合到AGA1蛋白上；将目标蛋白构建到pYD1质粒上，与AGA2蛋白融合表达，AGA2蛋白在N端，目标蛋白在C端，当含有pYD1质粒的EBY100酵母菌在含有半乳糖，同时不含葡萄糖的培养基中诱导表达时可以表达出AGA2-target protein融合蛋白，该融合蛋白通过AGA2结合到EBY100酵母细胞表面的AGA1蛋白上进而将目标蛋白展示在酵母表面。本产品为二代甘油菌株(一代种扩增两个世代后保种)，未经过大量扩繁，核DNA及表型稳定，菌落表型及生长曲线与原种匹配度大于99.5%。

操作方法

1，客户收到菌株后，不可直接吸取菌液接种扩繁。应先对菌种进行复壮，待长出单菌落后挑单菌落接菌扩繁；复壮方法如下：在超净台打开盖子，用接种环沾取少量甘油菌液采用交叉划线法（图1）在YPDA平板表面轻轻划线(注意：不要刺破培养基)，将平板封口后放30度培养3-5天，即可长出单菌落。

2，交叉划线法：划线的目的是经过几次不连续划线达到梯度稀释菌液的效果，保证能长出单菌落。具体步骤如下：

A，-80度取出的甘油菌应在超净台打开盖子，立即在表面挑取菌液/菌块划线，不用等融化后划线，固体状态时即可用接种环挑取划线，操作要点是“快速操作，立即划线”，目的是最大限度减少温度波动对菌种造成的“冷休克”和冰晶物理损伤；如果收到的是液体甘油菌，可直接划线，在超净台打开盖子用接种环沾取少量甘油菌液划线。

B，取出无菌接种环，注意不要污染，图1所示为标准的五段交叉划线法，分五个区，每个区划三条直线，第1、2区可共用一个接种环，划好1，2区后换一个新接种环划第3区，再换一个新接种环划第4区，再换一个新接种环划第5区，每一次换接种环划线要经过前面划线区的划线痕迹，这样就相当于对菌种进行稀释。简易划线也可只划3个区或4个区。          

C，客户也可用金属接种环灼烧后划线；本公司提供的接种环为ABS材质，不可灼烧。  

图1. 五段交叉划线法示意图

注意事项

1，客户收到二代甘油菌株后，应立即放-80度保存，不可放-20度保存。

2，应减少甘油菌冻融的次数，冻融的次数越多，菌种的活力越低；

3，若扩繁菌种，注意一次扩繁不要超过四个世代，以保证菌种基因组的稳定；扩增后重新保存的菌种必须对菌种做表型、功能验证，所有表型、功能保持完好的菌株才能作为菌种使用。