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PIR1二代甘油菌种	Bec-3100	400ul/1支

基因型

F- ∆lac169 rpoS(Am) robA1 creC510 hsdR514 endA recA1 uidA(∆MluI)::pir-116

产品说明

PIR1 菌株是 Invitrogen 公司开发的大肠杆菌菌株，专门用于含R6Kγ复制子的质粒的克隆与扩繁，核心元件是pir-116：编码突变型π复制蛋白，该蛋白可高效结合载体上的 R6Kγ复制起点，启动质粒复制，使含R6Kγ复制子的质粒在PIR1中维持~250拷贝/细胞的高拷贝状态，是野生型pir菌株（PIR2，~15 拷贝/细胞）的16倍以上。recA1同源重组酶基因缺陷，避免载体与细菌染色体发生非特异性同源重组，同时防止载体自身因重复序列发生重排，确保载体遗传稳定性。endA：核酸内切酶 endA基因缺陷，消除该酶对质粒的降解，提升质粒提取质量。hsdR514：限制酶系统基因缺陷，丧失对异源 DNA的切割能力，避免导入的质粒被大肠内源性限制酶降解，提高转化效率。本产品为二代甘油菌株(一代种扩增两个世代后保种)，未经过大量扩繁，核DNA及表型稳定，菌落表型及生长曲线与原种匹配度大于99.5%。

操作方法

1，客户收到菌株后，不可直接吸取菌液接种扩繁。应先对菌种进行复壮，待长出单菌落后挑单菌落接菌扩繁；复壮方法如下：在超净台打开盖子，用接种环沾取少量甘油菌液采用交叉划线法（图1）在LB平板表面轻轻划线(注意：不要刺破培养基)，将平板封口后放37度培养15-20h，即可长出单菌落。

2，交叉划线法：划线的目的是经过几次不连续划线达到梯度稀释菌液的效果，保证能长出单菌落。具体步骤如下：

A，-80度取出的甘油菌应在超净台打开盖子，立即在表面挑取菌液/菌块划线，不用等融化后划线，固体状态时即可用接种环挑取划线，操作要点是“快速操作，立即划线”，目的是最大限度减少温度波动对菌种造成的“冷休克”和冰晶物理损伤；如果收到的是液体甘油菌，可直接划线，在超净台打开盖子用接种环沾取少量甘油菌液划线。

B，取出无菌接种环，注意不要污染，图1所示为标准的五段交叉划线法，分五个区，每个区划三条直线，第1、2区可共用一个接种环，划好1，2区后换一个新接种环划第3区，再换一个新接种环划第4区，再换一个新接种环划第5区，每一次换接种环划线要经过前面划线区的划线痕迹，这样就相当于对菌种进行稀释。简易划线也可只划3个区或4个区。          

C，客户也可用金属接种环灼烧后划线；本公司提供的接种环为ABS材质，不可灼烧。  

图1. 五段交叉划线法示意图

注意事项

1，客户收到二代甘油菌株后，应立即放-80度保存，不可放-20度保存。

2，应减少甘油菌冻融的次数，冻融的次数越多，菌种的活力越低；

3，若扩繁菌种，注意一次扩繁不要超过四个世代，以保证菌种基因组的稳定；扩增后重新保存的菌种必须对菌种做表型、功能验证，所有表型、功能保持完好的菌株才能作为菌种使用。