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SM10-λpir二代甘油菌种	Bec-3060	400ul/1支

基因型

thi thr leu tonA lacY supE recA::RP4-2-Tc::Mu [λpir]

产品说明

SM10-λpir是从SM10菌株改造而来，SM10本身是S17-1菌株的衍生株。S17-1 是构建用于高效接合转移的经典菌株，它整合了RP4质粒（也称为 RK2 质粒）的接合转移装置（tra 基因）到其染色体上。整合的RP4赋予S17-1 (以及其衍生株 SM10) 将自身携带的可移动质粒高效地转移给受体菌的能力。在SM10的基础上，通过溶原化的方式，将λ噬菌体的一个特殊变体λpir 整合到了染色体上，即SM10-λpir，pir蛋白是R6K质粒复制起点 (oriR6K 或 oriV) 的特异性复制起始蛋白。只有表达pir蛋白的宿主细胞才能复制带有 oriR6K 复制起点的质粒。tonA: 对噬菌体T1具有抗性；lacY: β-半乳糖苷透性酶缺陷，影响乳糖利用；recA突变大大降低了菌株自身的重组能力，有助于保持引入质粒的稳定性，避免其与染色体或其他质粒发生不必要的重组；RP4-2-Tc:: Mu: 这是最核心的特征之一，这意味着完整的 RP4 质粒（RK2 质粒）的接合转移装置 (tra 基因) 被整合到了染色体上。这赋予了 SM10 (pir) 组成型表达接合转移功能的能力，使其能作为高效的供体菌；整合结构上还包含一个 Mu 噬菌体序列；带有四环素抗性标记。SM10 λpir的主要用途就是作为接合转移实验中的供体菌 (Donor)，目标受体菌可以是其他革兰氏阴性菌，如沙门氏菌、志贺氏菌、假单胞菌、耶尔森菌、霍乱弧菌等。本产品为二代甘油菌株(一代种扩增两个世代后保种)，未经过大量扩繁，核DNA及表型稳定，菌落表型及生长曲线与原种匹配度大于99.5%。

操作方法

1，客户收到菌株后，不可直接吸取菌液接种扩繁。应先对菌种进行复壮，待长出单菌落后挑单菌落接菌扩繁；复壮方法如下：在超净台打开盖子，用接种环沾取少量甘油菌液采用交叉划线法（图1）在LB平板表面轻轻划线(注意：不要刺破培养基)，将平板封口后放37度培养15-20h，即可长出单菌落。

2，交叉划线法：划线的目的是经过几次不连续划线达到梯度稀释菌液的效果，保证能长出单菌落。具体步骤如下：

A，-80度取出的甘油菌应在超净台打开盖子，立即在表面挑取菌液/菌块划线，不用等融化后划线，固体状态时即可用接种环挑取划线，操作要点是“快速操作，立即划线”，目的是最大限度减少温度波动对菌种造成的“冷休克”和冰晶物理损伤；如果收到的是液体甘油菌，可直接划线，在超净台打开盖子用接种环沾取少量甘油菌液划线。

B，取出无菌接种环，注意不要污染，图1所示为标准的五段交叉划线法，分五个区，每个区划三条直线，第1、2区可共用一个接种环，划好1，2区后换一个新接种环划第3区，再换一个新接种环划第4区，再换一个新接种环划第5区，每一次换接种环划线要经过前面划线区的划线痕迹，这样就相当于对菌种进行稀释。简易划线也可只划3个区或4个区。          

C，客户也可用金属接种环灼烧后划线；本公司提供的接种环为ABS材质，不可灼烧。  

图1. 五段交叉划线法示意图

注意事项

1，客户收到二代甘油菌株后，应立即放-80度保存，不可放-20度保存。

2，应减少甘油菌冻融的次数，冻融的次数越多，菌种的活力越低；

3，若扩繁菌种，注意一次扩繁不要超过四个世代，以保证菌种基因组的稳定；扩增后重新保存的菌种必须对菌种做表型、功能验证，所有表型、功能保持完好的菌株才能作为菌种使用。