酿酒酵母感受态细胞
产品规格 （CAT#: YC1092）
∆ccc1 Competent Cell: 100μl/支 保存： -80℃（3个月）
pYES2 (control vector, 10 ng/μl) 10μl 保存：-80℃（12个月）
Carrier DNA (10 μg/μl) 100μl 保存：-20℃（12个月）
PEG/LiAC: 5ml 保存： 4℃（12个月）
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产品名称 |
产品货号 |
产品规格 |
说明书下载 |
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∆ccc1 感受态细胞 |
YC1092S |
10×100ul |
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| YC1092M | 50×100ul |
基因型
MATa his3Δ1 leu2 met15Δ ura3-52 Δccc1
产品说明
∆ccc1菌株来源于酿酒酵母BY4741，为配子MATa型，主要应用于铁离子转运蛋白的研究中。CCC1 (Cross-Complements Ca(2+) phenotype of csg1)基因是液泡Fe2+/Mn2+转运蛋白，参与铁、锰离子的运输；∆ccc1突变体中CCC1基因的整个编码区被删除，转运铁离子的能力降低，在SD/-Ura基础培养基（唯地货号：YM3104S）上可以正常生长，在含有高浓度硫酸亚铁（10mM）的SD/-Ura培养基上无法生长，是发现和研究铁离子转运蛋白的高效试验平台。∆ccc1酿酒酵母为组氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸 、尿嘧啶缺陷型菌株，可直接通过PEG/LiAc将pYES2、pDR195、pDR196等质粒转化进入∆ccc1细胞内，筛选标志为URA，可用SD-URA平板进行筛选。唯地生物生产的∆ccc1感受态细胞经特殊工艺制作，-80℃可保存三个月，pYES2质粒（5857bp，AmpR）检测转化效率>104 cfu/μg DNA。
操作方法
1.Carrier DNA 的预处理：将Carrier DNA 插入95℃金属浴5 min或插入浮漂中95℃水浴3 min，加热后快速插入冰中。
2. 取100 µl冰上融化的∆ccc1感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒1-3 µg，预处理后的Carrier DNA 10 µl，PEG/LiAc 500 µl并吸打几次混匀，30℃水浴30 min (15 min时翻转6-8次混匀)。
3. 将感受态移到42℃水浴15 min (7.5 min时翻转6-8次混匀)。
4. 5000 rpm离心 40 s弃上清，ddH2O 400 µl 重悬，离心 30s弃上清。
5. ddH2O 50 µl重悬，涂板，29℃培养48-96 h。
培养基配制亚铁离子转运试验示例/唯地生物验证试验
空载体pDR196为阴性对照； pDR196-ccc1(表达酵母CCC1蛋白，-1、-2：独立的两个菌落)为阳性对照；这两个质粒分别转化 ∆ccc1 酵母细胞，点板做表型分析。结果如图一所示：∆ccc1(含pDR196)菌株在SD/-Ura基础培养基中正常生长，在SD/-Ura+10 mM FeSO4 的培养基中不生长；∆ccc1(含pDR196-ccc1)菌株在SD/-Ura基础培养基中生长受抑制，在SD/-Ura+10 mM FeSO4 的培养基中正常生长；说明CCC1基因具有转运亚铁离子的功能。
补充说明：
1. 在SD/-Ura基础培养基中，酵母全长CCC1的组成型表达比WT高很多，这种全长蛋白的高表达是有毒的，所以∆ccc1(含pDR196-ccc1)菌株在SD/-Ura基础培养基中生长受抑制；
2. 酵母的不同菌落中目的蛋白的表达会表现出不同表达量的差异，所以∆ccc1(含pDR196-ccc1)-1与-2菌落在SD/ -Ura 基础培养基中生长受抑制的表型有差异。
培养基配制
1. 感受态细胞最好在冰上融化，转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
2. 酵母为真核生物，不易长期保存，建议保存时间不超过90天。
3. ∆ccc1酵母菌株对高温敏感，最适生长温度为27-30℃；高于31℃，生长速度和转化效率呈指数下降。
4. 酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢，培养基中缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA平板29℃，48 h培养可见直径1 mm克隆；涂SD单缺平板29℃，48-60 h培养可见直径1 mm克隆，涂SD双缺平板29℃，60-80 h培养可见直径1 mm克隆，涂SD三缺或四缺平板平板29℃，80-90h培养可见直径1 mm克隆。
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产品名称 |
产品货号 |
产品规格 |
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∆ccc1 感受态细胞 |
YC1092S |
10×100ul |
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| YC1092M | 50×100ul |
基因型
MATa his3Δ1 leu2 met15Δ ura3-52 Δccc1
产品说明
∆ccc1菌株来源于酿酒酵母BY4741，为配子MATa型，主要应用于铁离子转运蛋白的研究中。CCC1 (Cross-Complements Ca(2+) phenotype of csg1)基因是液泡Fe2+/Mn2+转运蛋白，参与铁、锰离子的运输；∆ccc1突变体中CCC1基因的整个编码区被删除，转运铁离子的能力降低，在SD/-Ura基础培养基（唯地货号：YM3104S）上可以正常生长，在含有高浓度硫酸亚铁（10mM）的SD/-Ura培养基上无法生长，是发现和研究铁离子转运蛋白的高效试验平台。∆ccc1酿酒酵母为组氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸 、尿嘧啶缺陷型菌株，可直接通过PEG/LiAc将pYES2、pDR195、pDR196等质粒转化进入∆ccc1细胞内，筛选标志为URA，可用SD-URA平板进行筛选。唯地生物生产的∆ccc1感受态细胞经特殊工艺制作，-80℃可保存三个月，pYES2质粒（5857bp，AmpR）检测转化效率>104 cfu/μg DNA。
操作方法
1.Carrier DNA 的预处理：将Carrier DNA 插入95℃金属浴5 min或插入浮漂中95℃水浴3 min，加热后快速插入冰中。
2. 取100 µl冰上融化的∆ccc1感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒1-3 µg，预处理后的Carrier DNA 10 µl，PEG/LiAc 500 µl并吸打几次混匀，30℃水浴30 min (15 min时翻转6-8次混匀)。
3. 将感受态移到42℃水浴15 min (7.5 min时翻转6-8次混匀)。
4. 5000 rpm离心 40 s弃上清，ddH2O 400 µl 重悬，离心 30s弃上清。
5. ddH2O 50 µl重悬，涂板，29℃培养48-96 h。
培养基配制亚铁离子转运试验示例/唯地生物验证试验
空载体pDR196为阴性对照； pDR196-ccc1(表达酵母CCC1蛋白，-1、-2：独立的两个菌落)为阳性对照；这两个质粒分别转化 ∆ccc1 酵母细胞，点板做表型分析。结果如图一所示：∆ccc1(含pDR196)菌株在SD/-Ura基础培养基中正常生长，在SD/-Ura+10 mM FeSO4 的培养基中不生长；∆ccc1(含pDR196-ccc1)菌株在SD/-Ura基础培养基中生长受抑制，在SD/-Ura+10 mM FeSO4 的培养基中正常生长；说明CCC1基因具有转运亚铁离子的功能。
补充说明：
1. 在SD/-Ura基础培养基中，酵母全长CCC1的组成型表达比WT高很多，这种全长蛋白的高表达是有毒的，所以∆ccc1(含pDR196-ccc1)菌株在SD/-Ura基础培养基中生长受抑制；
2. 酵母的不同菌落中目的蛋白的表达会表现出不同表达量的差异，所以∆ccc1(含pDR196-ccc1)-1与-2菌落在SD/ -Ura 基础培养基中生长受抑制的表型有差异。
培养基配制
1. 感受态细胞最好在冰上融化，转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
2. 酵母为真核生物，不易长期保存，建议保存时间不超过90天。
3. ∆ccc1酵母菌株对高温敏感，最适生长温度为27-30℃；高于31℃，生长速度和转化效率呈指数下降。
4. 酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢，培养基中缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA平板29℃，48 h培养可见直径1 mm克隆；涂SD单缺平板29℃，48-60 h培养可见直径1 mm克隆，涂SD双缺平板29℃，60-80 h培养可见直径1 mm克隆，涂SD三缺或四缺平板平板29℃，80-90h培养可见直径1 mm克隆。
