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PIR1 感受态细胞	DL3100S	10×100ul
	DL3100M	50×100ul

基因型

F- ∆lac169 rpoS(Am) robA1 creC510 hsdR514 endA recA1 uidA(∆MluI)::pir-116

产品说明

PIR1 菌株是 Invitrogen 公司开发的大肠杆菌菌株，专门用于含R6Kγ复制子的质粒的克隆与扩繁，核心元件是pir-116：编码突变型π复制蛋白，该蛋白可高效结合载体上的 R6Kγ复制起点，启动质粒复制，使含R6Kγ复制子的质粒在PIR1中维持~250拷贝/细胞的高拷贝状态，是野生型pir菌株（PIR2，~15 拷贝/细胞）的16倍以上。recA1同源重组酶基因缺陷，避免载体与细菌染色体发生非特异性同源重组，同时防止载体自身因重复序列发生重排，确保载体遗传稳定性。endA：核酸内切酶 endA基因缺陷，消除该酶对质粒的降解，提升质粒提取质量。hsdR514：限制酶系统基因缺陷，丧失对异源 DNA的切割能力，避免导入的质粒被大肠内源性限制酶降解，提高转化效率。PIR1感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒（2686bp，Amp^R）检测转化效率>1×10⁸ cfu/μg DNA。

操作方法

1. PIR1感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (SOC或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。

4. 5000 rpm离心1分钟收集菌体，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

注意事项

1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。

2. 混入目的DNA时应轻柔操作，转化高浓度质粒或连接产物可相应减少用于涂板的菌量。

3. 若要获得大量，高纯度质粒，建议在TB培养基（唯地CAT#：CM1018L）中摇菌培养（以标准质粒PUC19为例：在TB营养液中过夜培养的菌体浓度和质粒产量为LB的3-4倍，SOC的2倍）