酿酒酵母感受态细胞
产品规格（CAT#: YEL1060）
BY4741 Elec-Library Cell: 400μl/支 保存： -80℃（3个月）
pYES2 (control vector, 10 ng/μl) 10μl 保存：-80℃（12个月）
YB溶液（0.45um过滤除菌）: 50ml 保存： 4℃（3个月）
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产品名称 |
产品货号 |
产品规格 |
产品配套 |
说明书下载 |
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BY4741 文库电转感受态细胞 |
YEL1060S |
5×400ul |
YB溶液 50ml×1 |
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| YEL1060M | 20×400ul | YB溶液 50ml×4 |
MATa his3Δ1 leu2 met15Δ ura3-52
产品说明
BY4741菌株来源于酿酒酵母原始菌株——S288C，是实验室的常用菌株，为配子MATa型，广泛应用于钠，钾离子平衡；细胞抗盐；各种金属离子的吸收；重金属毒性；各种糖类，碳源对真核生物细胞生长的影响；过氧化物，超氧化物的吸收与运输的研究中。BY4741酿酒酵母为组氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸 、尿嘧啶缺陷型菌株，pYES2质粒为常用配套质粒，筛选标记为URA，可用SD-URA平板进行筛选。唯地生物生产的BY4741 Elec-Library Competent Cell为超高效率文库级别感受态，经特殊工艺制作，-80℃可保存三个月，pYES2质粒（5857bp，AmpR）检测转化效率>0.5×106 cfu/μg DNA。
操作方法
1. 取适量YB溶液（0.45um过滤除菌）放30度预热，每管感受态准备10ml。
2. 0.2 cm 电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟沥干水分，正置5分钟，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电击杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖，冰中静置5分钟充分降温。
3. 取-80℃保存的BY4741电击感受态细胞插入冰中2-5分钟，待其融化，加入预冷的目的质粒2-15ug (加入DNA的体积不超过40ul，DNA纯度越高越好，保证尽可能低的离子含量)。
4. 用200 μl枪头(用刀切除0.5cm枪尖)将感受态-DNA混合物缓慢吹打两次，除去气泡，快速转移到电击杯中（避免产生气泡），轻轻晃动电击杯使液面保持水平状态，盖上杯盖，插入冰中。
5. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=2.5kV，将电击杯从冰中拿出，用吸水纸擦拭吸干表面水渍，放入电转槽中，电击完成后拿出电转杯放室温，打开杯盖，10秒内加入1ml预热的YB溶液，转移到无菌的50ml离心管中，再加入1ml YB溶液清洗电转杯并转移到离心管中，补加8ml YB溶液，30℃ 250rpm 摇菌1.5h。
6. 3000 rpm离心 2 min弃上清，加入1-10ml 0.9%的氯化钠重悬涂板，29℃培养48-96 h。
培养基配制
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① YPDA (1L) (唯地CAT#：YM1020): Tryptone 20g Yeast extract 10g 0.2% adenine 15ml 补水到 950ml，用盐酸调PH到6.5； Agar 20g(for plates only) 121℃，15 min高压灭菌； 待培养基温度降到55℃时，加入已过滤的40% 葡萄糖 50 ml。
③ 0.2% adenine (0.5L) (唯地CAT#：YC6030) Adenine 1g； 补水到0.5L；溶解后高压灭菌或0.22µm 滤膜过滤除菌。
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② SD medium (1L)(唯地CAT#：YM3101-YM3611): Yeast Nitrogen base 6.7g 葡萄糖 20g Dropout 适量（按说明书） 补水到1L，调PH至5.8； Agar 20g(for plates only) 121℃，15 min高压灭菌。 |
注意事项
1. 感受态细胞最好在冰上融化，加入质粒DNA的体积不超过40ul，文库质粒纯度越高越好。
2. 文库用酵母感受态的转化效率数据是在加入不超过100ng标准质粒的试验中获得，若加入质粒过多，虽然得到的菌落数会增加，但是由此计算的转化效率会下降。
3. BY4741酵母菌株对高温敏感，最适生长温度为27-30℃；高于31℃，生长速度和转化效率呈指数下降。
4. 酵母为真核生物，不易长期保存，随感受态在-80℃保存时间的延长，转化效率会不断下降，建议保存时间不超过90天。
5. 酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢，培养基中缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA平板29℃，48 h培养可见直径1 mm克隆；涂SD单缺平板29℃，48-60 h培养可见直径1 mm克隆，涂SD双缺平板29℃，60-80 h培养可见直径1 mm克隆，涂SD三缺或四缺平板平板29℃，80-90h培养可见直径1 mm克隆。
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产品名称 |
产品货号 |
产品规格 |
产品配套 |
说明书下载 |
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BY4741 文库电转感受态细胞 |
YEL1060S |
5×400ul |
YB溶液 50ml×1 |
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| YEL1060M | 20×400ul | YB溶液 50ml×4 |
MATa his3Δ1 leu2 met15Δ ura3-52
产品说明
BY4741菌株来源于酿酒酵母原始菌株——S288C，是实验室的常用菌株，为配子MATa型，广泛应用于钠，钾离子平衡；细胞抗盐；各种金属离子的吸收；重金属毒性；各种糖类，碳源对真核生物细胞生长的影响；过氧化物，超氧化物的吸收与运输的研究中。BY4741酿酒酵母为组氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸 、尿嘧啶缺陷型菌株，pYES2质粒为常用配套质粒，筛选标记为URA，可用SD-URA平板进行筛选。唯地生物生产的BY4741 Elec-Library Competent Cell为超高效率文库级别感受态，经特殊工艺制作，-80℃可保存三个月，pYES2质粒（5857bp，AmpR）检测转化效率>0.5×106 cfu/μg DNA。
操作方法
1. 取适量YB溶液（0.45um过滤除菌）放30度预热，每管感受态准备10ml。
2. 0.2 cm 电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟沥干水分，正置5分钟，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电击杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖，冰中静置5分钟充分降温。
3. 取-80℃保存的BY4741电击感受态细胞插入冰中2-5分钟，待其融化，加入预冷的目的质粒2-15ug (加入DNA的体积不超过40ul，DNA纯度越高越好，保证尽可能低的离子含量)。
4. 用200 μl枪头(用刀切除0.5cm枪尖)将感受态-DNA混合物缓慢吹打两次，除去气泡，快速转移到电击杯中（避免产生气泡），轻轻晃动电击杯使液面保持水平状态，盖上杯盖，插入冰中。
5. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=2.5kV，将电击杯从冰中拿出，用吸水纸擦拭吸干表面水渍，放入电转槽中，电击完成后拿出电转杯放室温，打开杯盖，10秒内加入1ml预热的YB溶液，转移到无菌的50ml离心管中，再加入1ml YB溶液清洗电转杯并转移到离心管中，补加8ml YB溶液，30℃ 250rpm 摇菌1.5h。
6. 3000 rpm离心 2 min弃上清，加入1-10ml 0.9%的氯化钠重悬涂板，29℃培养48-96 h。
培养基配制
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① YPDA (1L) (唯地CAT#：YM1020): Tryptone 20g Yeast extract 10g 0.2% adenine 15ml 补水到 950ml，用盐酸调PH到6.5； Agar 20g(for plates only) 121℃，15 min高压灭菌； 待培养基温度降到55℃时，加入已过滤的40% 葡萄糖 50 ml。
③ 0.2% adenine (0.5L) (唯地CAT#：YC6030) Adenine 1g； 补水到0.5L；溶解后高压灭菌或0.22µm 滤膜过滤除菌。
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② SD medium (1L)(唯地CAT#：YM3101-YM3611): Yeast Nitrogen base 6.7g 葡萄糖 20g Dropout 适量（按说明书） 补水到1L，调PH至5.8； Agar 20g(for plates only) 121℃，15 min高压灭菌。 |
注意事项
1. 感受态细胞最好在冰上融化，加入质粒DNA的体积不超过40ul，文库质粒纯度越高越好。
2. 文库用酵母感受态的转化效率数据是在加入不超过100ng标准质粒的试验中获得，若加入质粒过多，虽然得到的菌落数会增加，但是由此计算的转化效率会下降。
3. BY4741酵母菌株对高温敏感，最适生长温度为27-30℃；高于31℃，生长速度和转化效率呈指数下降。
4. 酵母为真核生物，不易长期保存，随感受态在-80℃保存时间的延长，转化效率会不断下降，建议保存时间不超过90天。
5. 酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢，培养基中缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA平板29℃，48 h培养可见直径1 mm克隆；涂SD单缺平板29℃，48-60 h培养可见直径1 mm克隆，涂SD双缺平板29℃，60-80 h培养可见直径1 mm克隆，涂SD三缺或四缺平板平板29℃，80-90h培养可见直径1 mm克隆。
