酿酒酵母感受态细胞
产品规格 （CAT#: YC1190）
S288C Competent Cell: 100μl/支 保存： -80℃（3个月）
pRS415-HYG(control vector, 10ng/μl) 10μl 保存：-80℃（12个月）
Carrier DNA (10 μg/μl) 100μl 保存：-20℃（12个月）
PEG/LiAC: 5ml 保存： 4℃（12个月）
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产品名称 |
产品货号 |
产品规格 |
说明书下载 |
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S288C 感受态细胞 |
YC1190S |
10×100ul |
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| YC1190M | 50×100ul |
基因型
MATαSUC2 mal mel gal2 CUP1 flo1 flo8-1
产品说明
S288C是酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）最重要和研究最深入的实验室菌株，是酵母研究的“模式生物中的模式菌株”，也是酵母中第一个被测序出的菌株（NCBI中酵母参考序列来自S288C）。它是由Robert Mortimer和Robert Hawthorne在20世纪 50 年代在加州大学伯克利分校通过一系列精心设计的杂交和单孢子分离选育而来。其选育目标是获得一个遗传背景清晰、稳定、生长良好、孢子形成能力强的菌株。其关键祖包括菌株EM93（一个来自英格兰的野生分离株）和一系列用于引入特定标记（如 SUC2、MAL）的杂交后代。“S288C”命名：“S”代表“Saccharomyces”，“288” 是 Mortimer 实验室的菌株收藏编号，“C”表示它是该谱系中选出的第三个单倍体分离株。S288C菌株具有正常的蔗糖酶和铜离子抗性基因；mal：不能利用麦芽糖；mel：不能发酵蜜二糖（与 GAL 基因簇连锁）；gal2：半乳糖透性酶缺陷，导致半乳糖利用缓慢，在含半乳糖的培养基中生长缓慢；flo1 flo8-1：絮凝调控基因突变，导致絮凝能力丧失；菌株表现为分散生长，静置不聚集。S288C菌株无可用的营养缺陷筛选标记，可转化G418、HYG等抗生素筛选质粒。S288C感受态细胞经特殊工艺制作，-80℃可保存三个月，pRS415-HYG质粒（5857bp，AmpR）检测转化效率>200 cfu/μg DNA。
操作方法
1. Carrier DNA 的预处理：将Carrier DNA 插入95℃金属浴5 min或插入浮漂中95℃水浴3 min，加热后快速插入冰中。
2. 取100 µl冰上融化的S288C感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒2-5 µg，预处理后的Carrier DNA 10 µl，PEG/LiAc 500 µl并吸打几次混匀，30℃水浴30 min (15 min时翻转6-8次混匀)。
3. 将管放42℃水浴15 min (7.5 min时翻转6-8次混匀)。
4. 5000 rpm离心 40 s弃上清，ddH2O 400 µl 重悬，离心 30s弃上清。
5. ddH2O 50 µl重悬，涂板（筛选平板可根据转化质粒的筛选标记选择），29℃培养48-96 h。
培养基配制
① YPDA (1L) (唯地CAT#：YM1020):
Tryptone 20g
Yeast extract 10g
0.2% adenine 15ml
补水到 950ml，用盐酸调PH到6.5；
Agar 20g(for plates only)
121℃，15 min高压灭菌；
待培养基温度降到55℃时，加入已过滤的40% 葡萄糖 50 ml。
② 0.2% adenine (1L) (唯地CAT#：YC6030)
Adenine 2g； 补水到1L；溶解后高压灭菌或0.22µm 滤膜过滤除菌。
潮霉素溶液配制（唯地CAT#：BC1010L）：
Hygromycin B 潮霉素B 50mg/ml溶于无菌ddH2O，完全溶解后用0.22um的滤膜过滤除菌；酵母中工作浓度：200-300 µg/ml。
注意事项
1. 感受态细胞最好在冰上融化，转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量，同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量。
2. S288C酵母菌株对高温敏感，最适生长温度为27-30℃；高于31℃，生长速度和转化效率呈指数下降。
3. 酵母在添加了HYG的培养基中生长速度比YPDA培养基慢，潮霉素浓度越高生长越慢。
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产品名称 |
产品货号 |
产品规格 |
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S288C 感受态细胞 |
YC1190S |
10×100ul |
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基因型
MATαSUC2 mal mel gal2 CUP1 flo1 flo8-1
产品说明
S288C是酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）最重要和研究最深入的实验室菌株，是酵母研究的“模式生物中的模式菌株”，也是酵母中第一个被测序出的菌株（NCBI中酵母参考序列来自S288C）。它是由Robert Mortimer和Robert Hawthorne在20世纪 50 年代在加州大学伯克利分校通过一系列精心设计的杂交和单孢子分离选育而来。其选育目标是获得一个遗传背景清晰、稳定、生长良好、孢子形成能力强的菌株。其关键祖包括菌株EM93（一个来自英格兰的野生分离株）和一系列用于引入特定标记（如 SUC2、MAL）的杂交后代。“S288C”命名：“S”代表“Saccharomyces”，“288” 是 Mortimer 实验室的菌株收藏编号，“C”表示它是该谱系中选出的第三个单倍体分离株。S288C菌株具有正常的蔗糖酶和铜离子抗性基因；mal：不能利用麦芽糖；mel：不能发酵蜜二糖（与 GAL 基因簇连锁）；gal2：半乳糖透性酶缺陷，导致半乳糖利用缓慢，在含半乳糖的培养基中生长缓慢；flo1 flo8-1：絮凝调控基因突变，导致絮凝能力丧失；菌株表现为分散生长，静置不聚集。S288C菌株无可用的营养缺陷筛选标记，可转化G418、HYG等抗生素筛选质粒。S288C感受态细胞经特殊工艺制作，-80℃可保存三个月，pRS415-HYG质粒（5857bp，AmpR）检测转化效率>200 cfu/μg DNA。
操作方法
1. Carrier DNA 的预处理：将Carrier DNA 插入95℃金属浴5 min或插入浮漂中95℃水浴3 min，加热后快速插入冰中。
2. 取100 µl冰上融化的S288C感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒2-5 µg，预处理后的Carrier DNA 10 µl，PEG/LiAc 500 µl并吸打几次混匀，30℃水浴30 min (15 min时翻转6-8次混匀)。
3. 将管放42℃水浴15 min (7.5 min时翻转6-8次混匀)。
4. 5000 rpm离心 40 s弃上清，ddH2O 400 µl 重悬，离心 30s弃上清。
5. ddH2O 50 µl重悬，涂板（筛选平板可根据转化质粒的筛选标记选择），29℃培养48-96 h。
培养基配制
① YPDA (1L) (唯地CAT#：YM1020):
Tryptone 20g
Yeast extract 10g
0.2% adenine 15ml
补水到 950ml，用盐酸调PH到6.5；
Agar 20g(for plates only)
121℃，15 min高压灭菌；
待培养基温度降到55℃时，加入已过滤的40% 葡萄糖 50 ml。
② 0.2% adenine (1L) (唯地CAT#：YC6030)
Adenine 2g； 补水到1L；溶解后高压灭菌或0.22µm 滤膜过滤除菌。
潮霉素溶液配制（唯地CAT#：BC1010L）：
Hygromycin B 潮霉素B 50mg/ml溶于无菌ddH2O，完全溶解后用0.22um的滤膜过滤除菌；酵母中工作浓度：200-300 µg/ml。
注意事项
1. 感受态细胞最好在冰上融化，转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量，同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量。
2. S288C酵母菌株对高温敏感，最适生长温度为27-30℃；高于31℃，生长速度和转化效率呈指数下降。
3. 酵母在添加了HYG的培养基中生长速度比YPDA培养基慢，潮霉素浓度越高生长越慢。
