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10-beta 感受态细胞	DL3080S	10×100ul
	DL3080M	50×100ul

基因型

Δ(ara-leu) 7697 araD139  fhuA ΔlacX74 galK16 galE15 e14- ϕ80dlacZΔM15  recA1 relA1 endA1 nupG  rpsL (StrR) rph spoT1 Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)

产品说明

10-beta菌株来源于MC1061菌株，基因型接近DH10B菌株，具有与DH10B类似的功能，更适合克隆大质粒和BAC文库。mcrA、mcrBC及mrr突变使10-beta菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA (Therefore ,genomic DNA ,both prokaryotic and eukaryotic,can be cloned efficiently in 10-beta)。recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。ϕ80lacZ∆M15 marker的存在使10-beta可用于蓝白斑筛选； fhuA突变赋予其对T1噬菌体的抗性；rpsL赋予其链霉素抗性。10-beta感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒（2686bp，Amp^R）检测转化效率>10⁸ cfu/μg DNA。

操作方法

1. 10-beta感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700 μl不含 抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。

4. 5000 rpm离心1分钟收集菌体，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15h。

注意事项

1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，会降低转化效率。混入目的DNA时应轻柔操作，转化高浓度的质粒或高效率的连接产物应减少最终用于涂板的菌量。

2. 请勿使用SOC培养基，可用2YT/LB复苏，也可用专用的复苏液RE Outgrowth Medium（唯地CAT#：RE1011L）。

3. 若要获得大量，高纯度质粒，建议在TB培养基（唯地CAT#：CM1018L）中摇菌培养（以标准质粒PUC19为例：在TB营养液中过夜培养的菌体浓度和质粒产量为LB的3-4倍，SOC的2倍）