克隆感受态细胞
产品规格（CAT#: DL3090）
OmniMAX2 T1： 100μl/支
pUC19 (control vector，10pg/μl): 10μl
保存条件(保质期)： -80℃（6个月）
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产品名称 |
产品货号 |
产品规格 |
说明书下载 |
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OmniMAX2 T1 感受态细胞 |
DL3090S |
10×100ul |
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| DL3090M | 50×100ul |
基因型
F′{proAB+ lacIq lacZ∆M15 Tn10(TetR) ∆(ccdAB)} mcrA ∆(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80(lacZ)∆M15 ∆(lacZYA-argF) U169 endA1 recA1 supE44 thi-1 gyrA96 relA1 tonA panD
产品说明
OmniMAX2 T1是Dh5α的衍生菌株，在DH5的基因组中引入了系列突变(mcrA Δ(mrr hsdRMS-mcrBC)使其缺少K型大肠杆菌的限制性酶系统，OmniMAX2 T1菌株无法对外源DNA进行标记、限制，提高了外源甲基化DNA的克隆效率，同时具有核酸酶 (endA)突变、重组酶 (recA)突变，增强了外源DNA的稳定性，存在于F´因子上的lacIqZΔM15基因使此菌株可以进行蓝白斑筛选；同时引入tonA 基因型，赋予其对噬菌体 T1、T5 的抗性。OmniMAX2 T1菌株具有四环素抗性，感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒（2686bp，AmpR）检测转化效率>2×109 cfu/μg DNA。
常规操作方法
1. OmniMAX2 T1感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
注意事项
1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。混入目的DNA时应轻柔操作。转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
2. 此菌株具有四环素抗性，拥有这三种抗性的质粒无法使用。
3. 若要获得大量，高纯度质粒，建议在TB培养基（唯地CAT#：CM1018L）中摇菌培养（以标准质粒PUC19为例：在TB营养液中过夜培养的菌体浓度和质粒产量为LB的3-4倍，SOC的2倍）
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产品名称 |
产品货号 |
产品规格 |
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OmniMAX2 T1 感受态细胞 |
DL3090S |
10×100ul |
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基因型
F′{proAB+ lacIq lacZ∆M15 Tn10(TetR) ∆(ccdAB)} mcrA ∆(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80(lacZ)∆M15 ∆(lacZYA-argF) U169 endA1 recA1 supE44 thi-1 gyrA96 relA1 tonA panD
产品说明
OmniMAX2 T1是Dh5α的衍生菌株，在DH5的基因组中引入了系列突变(mcrA Δ(mrr hsdRMS-mcrBC)使其缺少K型大肠杆菌的限制性酶系统，OmniMAX2 T1菌株无法对外源DNA进行标记、限制，提高了外源甲基化DNA的克隆效率，同时具有核酸酶 (endA)突变、重组酶 (recA)突变，增强了外源DNA的稳定性，存在于F´因子上的lacIqZΔM15基因使此菌株可以进行蓝白斑筛选；同时引入tonA 基因型，赋予其对噬菌体 T1、T5 的抗性。OmniMAX2 T1菌株具有四环素抗性，感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒（2686bp，AmpR）检测转化效率>2×109 cfu/μg DNA。
常规操作方法
1. OmniMAX2 T1感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
注意事项
1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。混入目的DNA时应轻柔操作。转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
2. 此菌株具有四环素抗性，拥有这三种抗性的质粒无法使用。
3. 若要获得大量，高纯度质粒，建议在TB培养基（唯地CAT#：CM1018L）中摇菌培养（以标准质粒PUC19为例：在TB营养液中过夜培养的菌体浓度和质粒产量为LB的3-4倍，SOC的2倍）
