克隆感受态细胞
产品规格（CAT#: DL3060）
SM10-λpir： 100μl/支
pUC19 (control vector，10pg/μl): 10μl
保存条件(保质期)： -80℃（6个月）
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产品名称 |
产品货号 |
产品规格 |
说明书下载 |
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SM10-λpir 感受态细胞 |
DL3060S |
10×100ul |
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| DL3060M | 50×100ul |
基因型
thi thr leu tonA lacY supE recA::RP4-2-Tc::Mu [λpir]
产品说明
SM10-λpir是从SM10菌株改造而来，SM10本身是S17-1菌株的衍生株。S17-1 是构建用于高效接合转移的经典菌株，它整合了RP4质粒（也称为 RK2 质粒）的接合转移装置（tra 基因）到其染色体上。整合的RP4赋予S17-1 (以及其衍生株 SM10) 将自身携带的可移动质粒高效地转移给受体菌的能力。在SM10的基础上，通过溶原化的方式，将λ噬菌体的一个特殊变体λpir 整合到了染色体上，即SM10-λpir，pir蛋白是R6K质粒复制起点 (oriR6K 或 oriV) 的特异性复制起始蛋白。只有表达pir蛋白的宿主细胞才能复制带有 oriR6K 复制起点的质粒。tonA: 对噬菌体T1具有抗性；lacY: β-半乳糖苷透性酶缺陷，影响乳糖利用；recA突变大大降低了菌株自身的重组能力，有助于保持引入质粒的稳定性，避免其与染色体或其他质粒发生不必要的重组；RP4-2-Tc:: Mu: 这是最核心的特征之一，这意味着完整的 RP4 质粒（RK2 质粒）的接合转移装置 (tra 基因) 被整合到了染色体上，这赋予了 SM10 (pir) 组成型表达接合转移功能的能力，使其能作为高效的供体菌；RP4-2质粒本身有氨苄、卡那、四环素抗性，IS插入元件灭活相邻的氨苄青霉素抗性基因，Mu 噬菌体序列插入Tc元件，破坏了四环素抗性基因表达框，SM10-λpir只具有卡那抗性。SM10-λpir的主要用途就是作为接合转移实验中的供体菌 (Donor)，目标受体菌可以是其他革兰氏阴性菌，如沙门氏菌、志贺氏菌、假单胞菌、耶尔森菌、霍乱弧菌等。SM10-λpir感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒（2686bp，AmpR）检测转化效率>108 cfu/μg DNA。
操作方法
1. SM10-λpir感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心1分钟收集菌体，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的LB培养基上。
5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养（12-15 h）。
注意事项
1. 感受态细胞最好在冰中融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
2. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
3. SM10-λpir有卡那抗性，不能用于卡那霉素抗性质粒的转化。
4. 若要获得大量，高纯度质粒，建议在TB培养基（唯地CAT#：CM1018L）中摇菌培养（以标准质粒PUC19为例：在TB营养液中过夜培养的菌体浓度和质粒产量为LB的3-4倍，SOC的2倍）
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产品货号 |
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SM10-λpir 感受态细胞 |
DL3060S |
10×100ul |
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基因型
thi thr leu tonA lacY supE recA::RP4-2-Tc::Mu [λpir]
产品说明
SM10-λpir是从SM10菌株改造而来，SM10本身是S17-1菌株的衍生株。S17-1 是构建用于高效接合转移的经典菌株，它整合了RP4质粒（也称为 RK2 质粒）的接合转移装置（tra 基因）到其染色体上。整合的RP4赋予S17-1 (以及其衍生株 SM10) 将自身携带的可移动质粒高效地转移给受体菌的能力。在SM10的基础上，通过溶原化的方式，将λ噬菌体的一个特殊变体λpir 整合到了染色体上，即SM10-λpir，pir蛋白是R6K质粒复制起点 (oriR6K 或 oriV) 的特异性复制起始蛋白。只有表达pir蛋白的宿主细胞才能复制带有 oriR6K 复制起点的质粒。tonA: 对噬菌体T1具有抗性；lacY: β-半乳糖苷透性酶缺陷，影响乳糖利用；recA突变大大降低了菌株自身的重组能力，有助于保持引入质粒的稳定性，避免其与染色体或其他质粒发生不必要的重组；RP4-2-Tc:: Mu: 这是最核心的特征之一，这意味着完整的 RP4 质粒（RK2 质粒）的接合转移装置 (tra 基因) 被整合到了染色体上，这赋予了 SM10 (pir) 组成型表达接合转移功能的能力，使其能作为高效的供体菌；RP4-2质粒本身有氨苄、卡那、四环素抗性，IS插入元件灭活相邻的氨苄青霉素抗性基因，Mu 噬菌体序列插入Tc元件，破坏了四环素抗性基因表达框，SM10-λpir只具有卡那抗性。SM10-λpir的主要用途就是作为接合转移实验中的供体菌 (Donor)，目标受体菌可以是其他革兰氏阴性菌，如沙门氏菌、志贺氏菌、假单胞菌、耶尔森菌、霍乱弧菌等。SM10-λpir感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒（2686bp，AmpR）检测转化效率>108 cfu/μg DNA。
操作方法
1. SM10-λpir感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心1分钟收集菌体，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的LB培养基上。
5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养（12-15 h）。
注意事项
1. 感受态细胞最好在冰中融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
2. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
3. SM10-λpir有卡那抗性，不能用于卡那霉素抗性质粒的转化。
4. 若要获得大量，高纯度质粒，建议在TB培养基（唯地CAT#：CM1018L）中摇菌培养（以标准质粒PUC19为例：在TB营养液中过夜培养的菌体浓度和质粒产量为LB的3-4倍，SOC的2倍）
