酿酒酵母感受态细胞
产品规格 （CAT#: YC1150）
CEN.PK2-1C Competent Cell: 100μl/支 保存： -80℃（3个月）
pYES2 (control vector, 10 ng/μl) 10μl 保存：-80℃（12个月）
Carrier DNA (10 μg/μl) 100μl 保存：-20℃（12个月）
PEG/LiAC: 5ml 保存： 4℃（12个月）
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产品名称 |
产品货号 |
产品规格 |
说明书下载 |
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CEN.PK2-1C 感受态细胞 |
YC1150S |
10×100ul |
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| YC1150M | 50×100ul |
基因型
MATα his3D1 leu2-3_112 ura3-52 trp1-289 MAL2-8c SUC2
产品说明
CEN.PK2-1C属于著名的CEN.PK 系列酿酒酵母菌株，这个系列是由荷兰代尔夫特理工大学的Jack T. Pronk 教授实验室主导开发的，旨在创建一套遗传背景清晰、生理特性优良、适合进行代谢工程和生理学研究的标准实验室菌株，以弥补当时常用菌株S288C、BY4741等在某些生理特性（如生长速率、糖酵解、对营养限制的响应）上的不足。CEN.PK 系列的祖先菌株复杂，可以追溯到工业菌株和实验室菌株的杂交组合，主要贡献者包括：荷兰酵母菌种保藏中心 (CBS) 保藏的CBS 6412（一个用于烘焙或酿造的菌株）及实验室菌株：FL100（一个常用于基础研究的菌株），通过一系列精心设计的杂交、孢子分离和选择步骤，最终建立了具有不同交配型和营养缺陷型的同基因型菌株组合，包括 CEN.PK113（MATa）、CEN.PK2-1C (MATα)、CEN.PK122 (MATa/α 二倍体) 等。CEN.PK2-1C菌株的筛选标记为：leu2，ura3，trp1, his3，可配合诱导型质粒pYES2、pESC-LEU/URA/TRP/HIS或组成型表达质粒 pGADT7等使用。CEN.PK2-1C感受态细胞经特殊工艺制作，-80℃可保存三个月，pYES2质粒（5857bp，AmpR）检测转化效率>103 cfu/μg DNA。
操作方法
1. Carrier DNA 的预处理：将Carrier DNA 插入95℃金属浴5 min或插入浮漂中95℃水浴3 min，加热后快速插入冰中。
2. 取100 µl冰上融化的CEN.PK2-1C感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒2-5 µg，预处理后的Carrier DNA 10 µl，PEG/LiAc 500 µl并吸打几次混匀，30℃水浴30 min (15 min时翻转6-8次混匀)。
3. 将管放42℃水浴15 min (7.5 min时翻转6-8次混匀)。
4. 5000 rpm离心 40 s弃上清，ddH2O 400 µl 重悬，离心 30s弃上清。
5. ddH2O 50 µl重悬，涂板（筛选平板可根据转化质粒的筛选标记选择SD缺陷型平板），29℃培养48-96 h。
培养基配制
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① YPDA (1L) (唯地CAT#：YM1020): Tryptone 20g Yeast extract 10g 0.2% adenine 15ml 补水到 950ml，用盐酸调PH到6.5； Agar 20g(for plates only) 121℃，15 min高压灭菌； 待培养基温度降到55℃时，加入已过滤的40% 葡萄糖 50 ml。
③ 0.2% adenine (1L) (唯地CAT#：YC6030) Adenine 2g； 补水到1L；溶解后高压灭菌或0.22µm 滤膜过滤除菌。
④ pYES2蛋白诱导用诱导培养基：SGR/-Ura (唯地CAT#：YEM3134): pESC-HIS/LEU/TRP/URA蛋白诱导分别用诱导培养基：SGR/-His、SGR/-Leu、SGR /-Trp、SGR/-Ura(唯地CAT#：YEM3131/3132/3133/3134)，1L配方如下: Yeast Nitrogen base 6.7g Dropout （对应的氨基酸混合物） 适量（按说明书） 补水到 800ml，调PH至5.8，121℃，15 min高压灭菌； 待培养基温度降到55℃时，加入已过滤的carbon source：100 ml 20% 半乳糖，100 ml 10% 棉子糖。 |
② SD medium (1L) (唯地CAT#：YM3101-YM3611): Yeast Nitrogen base 6.7g 葡萄糖 20g Dropout 适量（按说明书） 补水到1L，调PH至5.8； Agar 20g(for plates only) 121℃，15 min高压灭菌。
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注意事项
1. 感受态细胞最好在冰上融化，转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量，同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量。
2. CEN.PK2-1C酵母菌株对高温敏感，最适生长温度为27-30℃；高于31℃，生长速度和转化效率呈指数下降。
3. 酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢，培养基中缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA平板29℃，48 h培养可见直径1 mm克隆；涂SD单缺平板29℃，48-60 h培养可见直径1 mm克隆，涂SD双缺平板29℃，60-80 h培养可见直径1 mm克隆，涂SD三缺或四缺平板平板29℃，80-90h培养可见直径1 mm克隆。
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产品名称 |
产品货号 |
产品规格 |
说明书下载 |
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CEN.PK2-1C 感受态细胞 |
YC1150S |
10×100ul |
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| YC1150M | 50×100ul |
基因型
MATα his3D1 leu2-3_112 ura3-52 trp1-289 MAL2-8c SUC2
产品说明
CEN.PK2-1C属于著名的CEN.PK 系列酿酒酵母菌株，这个系列是由荷兰代尔夫特理工大学的Jack T. Pronk 教授实验室主导开发的，旨在创建一套遗传背景清晰、生理特性优良、适合进行代谢工程和生理学研究的标准实验室菌株，以弥补当时常用菌株S288C、BY4741等在某些生理特性（如生长速率、糖酵解、对营养限制的响应）上的不足。CEN.PK 系列的祖先菌株复杂，可以追溯到工业菌株和实验室菌株的杂交组合，主要贡献者包括：荷兰酵母菌种保藏中心 (CBS) 保藏的CBS 6412（一个用于烘焙或酿造的菌株）及实验室菌株：FL100（一个常用于基础研究的菌株），通过一系列精心设计的杂交、孢子分离和选择步骤，最终建立了具有不同交配型和营养缺陷型的同基因型菌株组合，包括 CEN.PK113（MATa）、CEN.PK2-1C (MATα)、CEN.PK122 (MATa/α 二倍体) 等。CEN.PK2-1C菌株的筛选标记为：leu2，ura3，trp1, his3，可配合诱导型质粒pYES2、pESC-LEU/URA/TRP/HIS或组成型表达质粒 pGADT7等使用。CEN.PK2-1C感受态细胞经特殊工艺制作，-80℃可保存三个月，pYES2质粒（5857bp，AmpR）检测转化效率>103 cfu/μg DNA。
操作方法
1. Carrier DNA 的预处理：将Carrier DNA 插入95℃金属浴5 min或插入浮漂中95℃水浴3 min，加热后快速插入冰中。
2. 取100 µl冰上融化的CEN.PK2-1C感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒2-5 µg，预处理后的Carrier DNA 10 µl，PEG/LiAc 500 µl并吸打几次混匀，30℃水浴30 min (15 min时翻转6-8次混匀)。
3. 将管放42℃水浴15 min (7.5 min时翻转6-8次混匀)。
4. 5000 rpm离心 40 s弃上清，ddH2O 400 µl 重悬，离心 30s弃上清。
5. ddH2O 50 µl重悬，涂板（筛选平板可根据转化质粒的筛选标记选择SD缺陷型平板），29℃培养48-96 h。
培养基配制
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① YPDA (1L) (唯地CAT#：YM1020): Tryptone 20g Yeast extract 10g 0.2% adenine 15ml 补水到 950ml，用盐酸调PH到6.5； Agar 20g(for plates only) 121℃，15 min高压灭菌； 待培养基温度降到55℃时，加入已过滤的40% 葡萄糖 50 ml。
③ 0.2% adenine (1L) (唯地CAT#：YC6030) Adenine 2g； 补水到1L；溶解后高压灭菌或0.22µm 滤膜过滤除菌。
④ pYES2蛋白诱导用诱导培养基：SGR/-Ura (唯地CAT#：YEM3134): pESC-HIS/LEU/TRP/URA蛋白诱导分别用诱导培养基：SGR/-His、SGR/-Leu、SGR /-Trp、SGR/-Ura(唯地CAT#：YEM3131/3132/3133/3134)，1L配方如下: Yeast Nitrogen base 6.7g Dropout （对应的氨基酸混合物） 适量（按说明书） 补水到 800ml，调PH至5.8，121℃，15 min高压灭菌； 待培养基温度降到55℃时，加入已过滤的carbon source：100 ml 20% 半乳糖，100 ml 10% 棉子糖。 |
② SD medium (1L) (唯地CAT#：YM3101-YM3611): Yeast Nitrogen base 6.7g 葡萄糖 20g Dropout 适量（按说明书） 补水到1L，调PH至5.8； Agar 20g(for plates only) 121℃，15 min高压灭菌。
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注意事项
1. 感受态细胞最好在冰上融化，转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量，同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量。
2. CEN.PK2-1C酵母菌株对高温敏感，最适生长温度为27-30℃；高于31℃，生长速度和转化效率呈指数下降。
3. 酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢，培养基中缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA平板29℃，48 h培养可见直径1 mm克隆；涂SD单缺平板29℃，48-60 h培养可见直径1 mm克隆，涂SD双缺平板29℃，60-80 h培养可见直径1 mm克隆，涂SD三缺或四缺平板平板29℃，80-90h培养可见直径1 mm克隆。
