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MDS42 感受态细胞	DL3050S	10×100ul
	DL3050M	50×100ul

基因型

F- λ- lacZΔM15 ∆endA ∆fhuACDB ∆699gene

产品说明

MDS42菌株来源于MG1655菌株，大肠杆菌基因组中含有大量非必需DNA(包括复合转座子、简单转座子（IS）、噬菌体/病毒序列/残留片段、假基因等)，这些非必需DNA的存在可导致基因组不稳定或提高大肠杆菌突变体产生的概率，在构建一些含有毒性基因片段、噬菌体片段或其他原核基因组片段的质粒时往往导致质粒结构的不稳定或质粒中部分片段的丢失，或错误重组。为了降低大肠杆菌基因组中这些无效DNA或有害DNA的影响，提高大肠杆菌基因组和质粒DNA的稳定性，利用合成生物学的方法，删除E.coli K-12系野生型MG1655菌株的非必需DNA，同时保留细菌生长和质粒复制，蛋白表达所需的必需基因，产生了MDS（Multiple-deletion Series）菌株。MDS42为筛选出的第42号株系，此菌株共删除了704个基因（MG1655菌株基因组含有4,639,675个碱基，约4434个基因；MDS42菌株基因组含有3,976,359个碱基，约3730个基因，缺失了663,316个碱基，占MG1655基因组的14.30%），其中fhuABCD四个基因的突变赋予MDS42菌株对噬菌体T1的抗性；lacZΔM15使其可以用于蓝白斑筛选实验；核酸酶endA的删除有利于体内质粒DNA的稳定和高纯度DNA的提取；另外还有699个基因被成功删除。MDS42感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒（2686bp，Amp^R）检测转化效率>10⁸ cfu/μg DNA。

操作方法

1. MDS42感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入900 μl不含抗生素的无菌培养基 (SOC或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。

4. 5000 rpm离心1分钟收集菌体，留取60 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的SOC或LB培养基上，将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选，将平板放37℃培养至少16 h。

注意事项

1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率，混入目的DNA时应轻柔操作，转化高浓度的质粒或连接产物可减少用于涂板的菌量。

2. 若要获得大量，高纯度质粒，建议在TB培养基（唯地CAT#：CM1018L）中摇菌培养（以标准质粒PUC19为例：在TB营养液中过夜培养的菌体浓度和质粒产量为LB的3-4倍，SOC的2倍）