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BL21(DE3) 无裙边96孔板感受态	EC-96NA1002	96×100ul
BL21(DE3) 半裙边96孔板感受态	EC-96H1002	96×100ul
BL21(DE3) 带裙边96孔板感受态	EC-96W1002	96×100ul
BL21(DE3) 96孔圆孔圆底深孔板（1.2ml）感受态	EC-9612RDW1002	96×100ul
BL21(DE3) 96孔圆孔圆底深孔板（2ml）感受态	EC-9620RDW1002	96×100ul
BL21(DE3) 96孔方孔圆底深孔板（1.2ml）感受态	EC-9612SDW1002	96×100ul
BL21(DE3) 96孔方孔圆底深孔板（2.2ml）感受态	EC-9622SDW1002	96×100ul
BL21(DE3) 八连管感受态	EC-8ST1002	8×100ul

基因型

F- ompT hsdSB(rB- mB- ) gal dcm(DE3)

产品说明

BL21(DE3)菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)的基因。λ噬菌体DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶，该区整合于BL21的染色体上，所以称为BL21(DE3)。可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。BL21(DE3)感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒（2686bp，Amp^R）检测转化效率>10⁸cfu/μg DNA。

热激转化操作方法(90min)

1. BL21(DE3)感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，2分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用移液器轻轻吸打混匀，冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中，静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入适量不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200-500 rpm复苏60分钟。

4. 5000 rpm离心30S，收集菌体，留取适量上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT/LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

快速转化操作方法 (10min)

1. 提前15分钟将用到的筛选培养基平板拿到37℃预热。

2. 感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，2分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用移液器轻轻吸打混匀，冰中静置≥5分钟。

3. 将感受态细胞-DNA混合物转移到已经37℃预热的LB培养基上，涂均匀，表面无水渍，将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

● 注意： 感受态细胞用快速转化方法涂氨苄/羧苄青霉素抗性平板时效率较高，若涂卡那霉素或其他抗生素平板，转化效率下降(因无孵育步骤，卡那霉素等对菌体毒性较大)。若要提高卡那霉素或其他抗性质粒的转化效率，可增加孵育步骤：37度孵育30-60min。

快速热激转化操作方法 (25min,可提高转化效率)

1. 感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，2分钟后待菌块融化，加入目的DNA (质粒或连接产物)并用移液器轻轻吸打混匀，冰中静置5分钟。

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中，静置2分钟 (晃动会降低转化效率)。加入适量不含抗生素的2YT/LB，37℃，200-500 rpm复苏10分钟，涂板 (涂均匀，表面无水渍)。

3. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

注意事项

1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率，混入目的DNA时应轻柔操作。

2. 快速转化感受态细胞涂氨苄/羧苄青霉素抗性平板时效率较高，若涂卡那霉素或其他抗生素平板，转化效率下降(因无孵育步骤，卡那霉素等对菌体毒性较大)。若要提高卡那霉素或其他抗性质粒的转化效率，可增加孵育步骤：37度孵育30-60min。

3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。

4. 也可在复苏步骤后直接加入自诱导培养基（AIM-2YT Broth 唯地CAT#：AIM1016L），进行目标蛋白的诱导。