96孔板感受态细胞
产品说明
DL-96/8系列产品为96孔板/8连管包装感受态，除以下产品规格外，可根据客户需求定制感受态体积和包装形式。
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产品名称 |
产品货号 |
规格 | 说明书下载 |
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TOP10 无裙边96孔板感受态 |
DL-96NA1010 |
96×100ul |
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TOP10 半裙边96孔板感受态 |
DL-96H1010 |
96×100ul | |
| TOP10 带裙边96孔板感受态 |
DL-96W1010 |
96×100ul | |
| TOP10 96孔圆孔圆底深孔板（1.2ml）感受态 |
DL-9612RDW1010 |
96×100ul | |
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TOP10 96孔圆孔圆底深孔板（2ml）感受态 |
DL-9620RDW1010 |
96×100ul | |
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TOP10 96孔方孔圆底深孔板（1.2ml）感受态 |
DL-9612SDW1010 |
96×100ul | |
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TOP10 96孔方孔圆底深孔板（2.2ml）感受态 |
DL-9622SDW1010 |
96×100ul | |
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TOP10 八连管感受态 |
DL-8ST1010 |
8×100ul |
基因型
F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 araΔ139 Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL (StrR) endA1 nupG
产品说明
TOP10来源于MC1061菌株，是目前实验室最常用的感受态细胞之一，基因型与DH10B高度类似 (DH10B为galE15型，而TOP10为galU型)。TOP10生长速度快 (比DH5α快，但比Mach1-T1生长速度慢)，10小时可见克隆。recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。可用于构建克隆，蓝白斑筛选等实验。TOP10感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒（2686bp，AmpR）检测转化效率>2×109 cfu/μg DNA。
热激转化操作方法(90min)
1. TOP10感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，2分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用移液器轻轻吸打混匀，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中，静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入适量不含抗生素的无菌培养基 (SOC或LB)，混匀后37℃，200-500 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心30S，收集菌体，留取适量上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的SOC/LB培养基上。
5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15 h。
6. 也可在第3步直接加入适量SOC/LB 或TB培养基（唯地CAT#：CM1018L），300-1500 rpm摇菌，收菌提质粒(适合深孔板)。
快速转化操作方法 (10min)
1. 提前15分钟将用到的筛选培养基平板拿到37℃预热。
2. 感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，2分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用移液器轻轻吸打混匀，冰中静置≥5分钟。
3. 将感受态细胞-DNA混合物转移到已经37℃预热的LB培养基上，涂均匀，表面无水渍，将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15h。
4. 也可直接加入适量SOC/LB 或TB培养基（唯地CAT#：CM1018L），300-1500 rpm摇菌，收菌提质粒(适合深孔板)。
● 注意： 感受态细胞用快速转化方法涂氨苄/羧苄青霉素抗性平板时效率较高，若涂卡那霉素或其他抗生素平板，转化效率下降(因无孵育步骤，卡那霉素等对菌体毒性较大)。若要提高卡那霉素或其他抗性质粒的转化效率，可增加孵育步骤：37度孵育30-60min。
快速热激转化操作方法 (25min,可提高转化效率)
1. 感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，2分钟后待菌块融化，加入目的DNA (质粒或连接产物)并用移液器轻轻吸打混匀，冰中静置5分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中，静置2分钟 (晃动会降低转化效率)。加入适量不含抗生素的SOC/LB，37℃，200-500 rpm复苏10分钟，涂板 (涂均匀，表面无水渍)。
3. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15h。
4. 也可直接加入适量SOC/LB 或TB培养基（唯地CAT#：CM1018L），300-1500 rpm摇菌，收菌提质粒(适合深孔板)。
注意事项
1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率，混入目的DNA时应轻柔操作。
2. 快速转化感受态细胞涂氨苄/羧苄青霉素抗性平板时效率较高，若涂卡那霉素或其他抗生素平板，转化效率下降(因无孵育步骤，卡那霉素等对菌体毒性较大)。若要提高卡那霉素或其他抗性质粒的转化效率，可增加孵育步骤：37度孵育30-60min。
3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
4. 若要获得大量，高纯度质粒，建议在TB培养基（唯地CAT#：CM1018L）中摇菌培养（以标准质粒PUC19为例：在TB营养液中过夜培养的菌体浓度和质粒产量为LB的3-4倍，SOC的2倍）。
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产品名称 |
产品货号 |
规格 | 说明书下载 |
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TOP10 无裙边96孔板感受态 |
DL-96NA1010 |
96×100ul |
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TOP10 半裙边96孔板感受态 |
DL-96H1010 |
96×100ul | |
| TOP10 带裙边96孔板感受态 |
DL-96W1010 |
96×100ul | |
| TOP10 96孔圆孔圆底深孔板（1.2ml）感受态 |
DL-9612RDW1010 |
96×100ul | |
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TOP10 96孔圆孔圆底深孔板（2ml）感受态 |
DL-9620RDW1010 |
96×100ul | |
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TOP10 96孔方孔圆底深孔板（1.2ml）感受态 |
DL-9612SDW1010 |
96×100ul | |
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TOP10 96孔方孔圆底深孔板（2.2ml）感受态 |
DL-9622SDW1010 |
96×100ul | |
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TOP10 八连管感受态 |
DL-8ST1010 |
8×100ul |
基因型
F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 araΔ139 Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL (StrR) endA1 nupG
产品说明
TOP10来源于MC1061菌株，是目前实验室最常用的感受态细胞之一，基因型与DH10B高度类似 (DH10B为galE15型，而TOP10为galU型)。TOP10生长速度快 (比DH5α快，但比Mach1-T1生长速度慢)，10小时可见克隆。recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。可用于构建克隆，蓝白斑筛选等实验。TOP10感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒（2686bp，AmpR）检测转化效率>2×109 cfu/μg DNA。
热激转化操作方法(90min)
1. TOP10感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，2分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用移液器轻轻吸打混匀，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中，静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入适量不含抗生素的无菌培养基 (SOC或LB)，混匀后37℃，200-500 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心30S，收集菌体，留取适量上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的SOC/LB培养基上。
5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15 h。
6. 也可在第3步直接加入适量SOC/LB 或TB培养基（唯地CAT#：CM1018L），300-1500 rpm摇菌，收菌提质粒(适合深孔板)。
快速转化操作方法 (10min)
1. 提前15分钟将用到的筛选培养基平板拿到37℃预热。
2. 感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，2分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用移液器轻轻吸打混匀，冰中静置≥5分钟。
3. 将感受态细胞-DNA混合物转移到已经37℃预热的LB培养基上，涂均匀，表面无水渍，将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15h。
4. 也可直接加入适量SOC/LB 或TB培养基（唯地CAT#：CM1018L），300-1500 rpm摇菌，收菌提质粒(适合深孔板)。
● 注意： 感受态细胞用快速转化方法涂氨苄/羧苄青霉素抗性平板时效率较高，若涂卡那霉素或其他抗生素平板，转化效率下降(因无孵育步骤，卡那霉素等对菌体毒性较大)。若要提高卡那霉素或其他抗性质粒的转化效率，可增加孵育步骤：37度孵育30-60min。
快速热激转化操作方法 (25min,可提高转化效率)
1. 感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，2分钟后待菌块融化，加入目的DNA (质粒或连接产物)并用移液器轻轻吸打混匀，冰中静置5分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中，静置2分钟 (晃动会降低转化效率)。加入适量不含抗生素的SOC/LB，37℃，200-500 rpm复苏10分钟，涂板 (涂均匀，表面无水渍)。
3. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15h。
4. 也可直接加入适量SOC/LB 或TB培养基（唯地CAT#：CM1018L），300-1500 rpm摇菌，收菌提质粒(适合深孔板)。
注意事项
1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率，混入目的DNA时应轻柔操作。
2. 快速转化感受态细胞涂氨苄/羧苄青霉素抗性平板时效率较高，若涂卡那霉素或其他抗生素平板，转化效率下降(因无孵育步骤，卡那霉素等对菌体毒性较大)。若要提高卡那霉素或其他抗性质粒的转化效率，可增加孵育步骤：37度孵育30-60min。
3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
4. 若要获得大量，高纯度质粒，建议在TB培养基（唯地CAT#：CM1018L）中摇菌培养（以标准质粒PUC19为例：在TB营养液中过夜培养的菌体浓度和质粒产量为LB的3-4倍，SOC的2倍）。
