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INVSc1  感受态细胞	YC1050S	10×100ul
	YC1050M	50×100ul

基因型

MATa his3Δ1 leu2 trp1-289 ura3-52/MATα his3Δ1 leu2 trp1-289 ura3-52 

产品说明

INVSc1菌株是专门用来做重组蛋白表达的宿主酵母，pYES2质粒与INVSc1酵母配套使用，激活pYES2质粒的GAL1启动子的转录进而启动下游重组蛋白的表达。INVSc1为合子型，可直接通过PEG/LiAc将pYES2质粒转化进入INVSc1细胞内。质粒pYES2的筛选标志为URA，可用SD-URA板进行筛选。INVSc1感受态细胞经特殊工艺制作，-80℃可保存三个月，pYES2质粒（5857bp，Amp^R）检测转化效率>10⁴ cfu/μg DNA。

操作方法

1. Carrier DNA 的预处理：将Carrier DNA 插入95℃金属浴5 min或插入浮漂中95℃水浴3 min，加热后快速插入冰中。

2. 取100 µl冰上融化的INVSc1感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒2-5 µg，预处理后的Carrier DNA 10 µl，PEG/LiAc 500 µl并吸打几次混匀，30℃水浴30 min (15 min时翻转6-8次混匀)。

3. 将管放42℃水浴15 min (7.5 min时翻转6-8次混匀)。

4. 5000 rpm离心 40 s弃上清，ddH2O 400 µl 重悬，离心 30s弃上清。

5. ddH2O 50 µl重悬，涂板（筛选平板用：SD-U medium板），29℃培养48-96 h。

培养基配制

① 质粒筛选用：SD-U medium (1L)(唯地CAT#：YM3104):

     Yeast Nitrogen base                                6.7g

     葡萄糖                                                       20g

     Dropout （即DO Supplement –Ura）    适量（按说明书）

     补水到1L，调PH至5.8；

     Agar                     20g(for plates only)

     121℃，15 min高压灭菌。

② 蛋白诱导用：Induction Medium SGR/-U (1L)(唯地CAT#：YEM3134):

     Yeast Nitrogen base                                6.7g

     Dropout （即DO Supplement –Ura）    适量（按说明书）

     补水到 800ml，调PH至5.8，121℃，15 min高压灭菌；

     待培养基温度降到55℃时，加入已过滤的carbon source：100 ml 20% 半乳糖，100 ml 10% 棉子糖。

注意事项

1. 感受态细胞最好在冰上融化。

2. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

3. INVSc1酵母菌株对高温敏感，最适生长温度为27-30℃；高于31℃，生长速度和转化效率呈指数下降。