发根农杆菌感受态细胞
产品规格 （CAT#: AC1110）
C58C1： 100μl/支
pCAMBI2301（control vector，10ng/μl ) 10μl
保存条件(保质期)： -80℃（12个月）
|
产品名称 |
产品货号 |
产品规格 |
说明书下载 |
|
C58C1 感受态细胞 |
AC1110S |
10×100ul |
 |
| AC1110M | 50×100ul | ||
| AC1110L | 100×100ul |
基因型
Agrobacterium rhizogenes (strR,rifR ) pRiA4b (agropine type)
产品说明
发根农杆菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)农杆菌属(agrobacterium)的一种革兰氏阴性土壤细菌，它能够感染大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。C58C1发根农杆菌菌株含有pRiA4b农杆碱型Ri质粒，具有广泛的宿主范围（蔷薇科，夹竹桃科，豆科，茄科，黄芩，烟草等），同时具有链霉素，利福平抗性。本公司生产的C58C1化学转化感受态细胞经特殊工艺制作，pCAMBIA2301质粒（12739bp，KanR）检测转化效率>104 cfu/μg DNA。
常规操作方法
1.取-80℃保存的C58C1发根农杆菌感受态于室温或手心片刻待其部分融化，处于冰水混合状态时插入冰中。
2. 每100μl感受态加入0.01-1 μg质粒DNA（转化效率较高，第一次使用前最好做预实验确定所加质粒的量），用手快速、剧烈拨打管底混匀或用枪吹吸混匀，依次放于冰中静置5分钟、液氮5分钟、37℃水浴5分钟、冰浴5分钟。
3. 冰浴中拿出放室温，加入700μl 无抗生素的TY液体培养基，于28℃振荡培养2小时。
4. 6000 rpm 离心一分钟收菌，留取 100 μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的 TY平板上，倒置放于28℃培养箱培养2-3 天
● 农杆菌相关抗生素配方：
|
抗生素 |
配方 |
原液 |
工作液 |
|
羧苄青霉素(carb)(唯地CAT#：YC9040) |
双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 |
100 mg/ml |
50 μg/ml |
|
硫酸卡那霉素(kan)(唯地CAT#：YC9020) |
双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 |
100 mg/ml |
50 μg/ml |
|
壮观霉素(spec)(唯地CAT#：YC9070) |
双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 |
100 mg/ml |
75 μg/ml |
|
链霉素(strep)(唯地CAT#：YC9060) |
双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 |
100 mg/ml |
50 μg/ml |
|
利福平(rif)(唯地CAT#：YC9080) |
DMSO溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 |
60 mg/ml |
20 μg/ml |
|
庆大霉素(gent)(唯地CAT#：YC9090) |
双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 |
100 mg/ml |
40 μg/ml |
|
氯霉素（cam）(唯地CAT#：YC9030) |
无水乙醇溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 |
100 mg/ml |
68 ug/ml |
● 常用农杆菌抗性： (R：抗；S：敏感。)
|
农杆菌菌株 |
羧苄青霉素(carb) |
链霉素(strep) |
利福平(rif) |
氯霉素(cam) |
硫酸卡那霉素(kan) |
|
Ar.A4 |
S |
S |
S |
S |
R |
|
MSU440 |
S |
R |
S |
S |
S |
|
Ar.Qual |
S |
R |
S |
R |
S |
|
C58C1 |
S |
R |
R |
S |
S |
|
ATCC15834 |
S |
S |
S |
S |
S |
|
K599 |
S |
R |
S |
S |
S |
|
Ar.1193 |
R |
R |
R |
S |
S |
● TY配方（1L）（唯地CAT#：CM2210）
Tryptone 5g
Yeast extract 3g
补水到1L体积，完全溶解后，121度、20分钟高温灭菌
配制1M的氯化钙水溶液，121度、20分钟高温灭菌
每1L 灭菌的TY液体营养液中加入10ml 无菌的1M氯化钙水溶液即可。
若配制TY固体培养基，则加入15g 琼脂粉。
注意事项
1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转化效率急剧下降；质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
2. 混匀质粒时应用手指快速拨打管底或用枪吹吸混匀，务必使质粒快速、均匀分散开，与感受态细胞充分接触。转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
3. 平板上阳性克隆密度过大时，由于营养不足，阳性克隆生长变慢，菌落变小，为了获得大的菌落，应减少质粒用量或降低涂板的菌量。
4. C58C1具有链霉素、利福平抗性，不可用于具有链霉素抗性或利福平抗性质粒的转化。
|
产品名称 |
产品货号 |
产品规格 |
说明书下载 |
|
C58C1 感受态细胞 |
AC1110S |
10×100ul |
|
| AC1110M | 50×100ul | ||
| AC1110L | 100×100ul |
基因型
Agrobacterium rhizogenes (strR,rifR ) pRiA4b (agropine type)
产品说明
发根农杆菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)农杆菌属(agrobacterium)的一种革兰氏阴性土壤细菌，它能够感染大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。C58C1发根农杆菌菌株含有pRiA4b农杆碱型Ri质粒，具有广泛的宿主范围（蔷薇科，夹竹桃科，豆科，茄科，黄芩，烟草等），同时具有链霉素，利福平抗性。本公司生产的C58C1化学转化感受态细胞经特殊工艺制作，pCAMBIA2301质粒（12739bp，KanR）检测转化效率>104 cfu/μg DNA。
常规操作方法
1.取-80℃保存的C58C1发根农杆菌感受态于室温或手心片刻待其部分融化，处于冰水混合状态时插入冰中。
2. 每100μl感受态加入0.01-1 μg质粒DNA（转化效率较高，第一次使用前最好做预实验确定所加质粒的量），用手快速、剧烈拨打管底混匀或用枪吹吸混匀，依次放于冰中静置5分钟、液氮5分钟、37℃水浴5分钟、冰浴5分钟。
3. 冰浴中拿出放室温，加入700μl 无抗生素的TY液体培养基，于28℃振荡培养2小时。
4. 6000 rpm 离心一分钟收菌，留取 100 μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的 TY平板上，倒置放于28℃培养箱培养2-3 天
● 农杆菌相关抗生素配方：
|
抗生素 |
配方 |
原液 |
工作液 |
|
羧苄青霉素(carb)(唯地CAT#：YC9040) |
双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 |
100 mg/ml |
50 μg/ml |
|
硫酸卡那霉素(kan)(唯地CAT#：YC9020) |
双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 |
100 mg/ml |
50 μg/ml |
|
壮观霉素(spec)(唯地CAT#：YC9070) |
双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 |
100 mg/ml |
75 μg/ml |
|
链霉素(strep)(唯地CAT#：YC9060) |
双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 |
100 mg/ml |
50 μg/ml |
|
利福平(rif)(唯地CAT#：YC9080) |
DMSO溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 |
60 mg/ml |
20 μg/ml |
|
庆大霉素(gent)(唯地CAT#：YC9090) |
双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 |
100 mg/ml |
40 μg/ml |
|
氯霉素（cam）(唯地CAT#：YC9030) |
无水乙醇溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 |
100 mg/ml |
68 ug/ml |
● 常用农杆菌抗性： (R：抗；S：敏感。)
|
农杆菌菌株 |
羧苄青霉素(carb) |
链霉素(strep) |
利福平(rif) |
氯霉素(cam) |
硫酸卡那霉素(kan) |
|
Ar.A4 |
S |
S |
S |
S |
R |
|
MSU440 |
S |
R |
S |
S |
S |
|
Ar.Qual |
S |
R |
S |
R |
S |
|
C58C1 |
S |
R |
R |
S |
S |
|
ATCC15834 |
S |
S |
S |
S |
S |
|
K599 |
S |
R |
S |
S |
S |
|
Ar.1193 |
R |
R |
R |
S |
S |
● TY配方（1L）（唯地CAT#：CM2210）
Tryptone 5g
Yeast extract 3g
补水到1L体积，完全溶解后，121度、20分钟高温灭菌
配制1M的氯化钙水溶液，121度、20分钟高温灭菌
每1L 灭菌的TY液体营养液中加入10ml 无菌的1M氯化钙水溶液即可。
若配制TY固体培养基，则加入15g 琼脂粉。
注意事项
1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转化效率急剧下降；质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
2. 混匀质粒时应用手指快速拨打管底或用枪吹吸混匀，务必使质粒快速、均匀分散开，与感受态细胞充分接触。转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
3. 平板上阳性克隆密度过大时，由于营养不足，阳性克隆生长变慢，菌落变小，为了获得大的菌落，应减少质粒用量或降低涂板的菌量。
4. C58C1具有链霉素、利福平抗性，不可用于具有链霉素抗性或利福平抗性质粒的转化。
