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克隆感受态细胞

● 化转感受态
ER2738 Chemically Competent Cell

产品规格(CAT#: DL2070)

ER2738:                                                           100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                         10μl

保存条件(保质期):                                  -80℃(6个月)

产品名称
产品货号
产品规格
说明书下载
ER2738 感受态细胞
DL2070S 10×100ul
DL2070M 50×100ul


基因型

[F´proA+B+ lacIq Δ(lacZ)M15 zzf::Tn10 (tetr)] fhuA2 glnVΔ(lac-proAB) thi-1Δ(hsdS-mcrB)5


产品说明

ER2738,是主要的噬菌体展示用菌株,同时也可用于质粒构建,蛋白表达等实验,含有F'因子,可用于M13噬菌体的扩繁。lacIqZΔM15的存在使其可以用于蓝白斑筛选等实验;但不含核酸酶endA1突变,体内核酸酶含量较高,提取质粒时推荐使用质粒提取试剂盒中去蛋白液以去除菌体内核酸酶。ER2738菌株具有四环素抗性。ER2738感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19质粒(2686bpAmpR)检测转化效率>1×109 cfu/μg DNA


操作方法

1. ER2738感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB),混匀后37℃,200 rpm复苏60分钟。

4. 5000 rpm离心1分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。


注意事项

1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。混入目的DNA时应轻柔操作。

2. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。

3. 若要获得大量,高纯度质粒,建议在TB培养基中摇菌培养(以标准质粒PUC19为例:在TB营养液中过夜培养的菌体浓度和质粒产量为LB的3-4倍,SOC的2倍)

产品名称
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产品规格
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ER2738 感受态细胞
DL2070S 10×100ul
DL2070M 50×100ul


基因型

[F´proA+B+ lacIq Δ(lacZ)M15 zzf::Tn10 (tetr)] fhuA2 glnVΔ(lac-proAB) thi-1Δ(hsdS-mcrB)5


产品说明

ER2738,是主要的噬菌体展示用菌株,同时也可用于质粒构建,蛋白表达等实验,含有F'因子,可用于M13噬菌体的扩繁。lacIqZΔM15的存在使其可以用于蓝白斑筛选等实验;但不含核酸酶endA1突变,体内核酸酶含量较高,提取质粒时推荐使用质粒提取试剂盒中去蛋白液以去除菌体内核酸酶。ER2738菌株具有四环素抗性。ER2738感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19质粒(2686bpAmpR)检测转化效率>1×109 cfu/μg DNA


操作方法

1. ER2738感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB),混匀后37℃,200 rpm复苏60分钟。

4. 5000 rpm离心1分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。


注意事项

1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。混入目的DNA时应轻柔操作。

2. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。

3. 若要获得大量,高纯度质粒,建议在TB培养基中摇菌培养(以标准质粒PUC19为例:在TB营养液中过夜培养的菌体浓度和质粒产量为LB的3-4倍,SOC的2倍)