产品名称	产品货号	产品规格	说明书下载
EPI300 感受态细胞	DL1084S	10×100ul
	DL1084M	50×100ul

基因型

F^– mcrA ∆(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80dlacZ∆M15 ∆lacX74 recA1 endA1 araD139 ∆(ara,leu)7697 galU galK λ^– rpsL nupG trfA dhfr.

产品说明

EPI300细胞含有一个突变的trfA基因，该基因表达出的蛋白产物可以促进含有ori V复制子的质粒的高拷贝扩繁，诱导剂Ⅰ可以诱导trfA基因的表达。当含有ori V复制子质粒的EPI300细胞在LB/2YT或SOB培养基中生长时，trfA基因的表达被抑制，ori V复制子质粒的拷贝数维持在很低的水平；当在培养基中加入诱导剂Ⅰ，ori V复制子质粒的拷贝数可维持在很高的水平，提高了质粒产量。因此EPI300菌株可以降低ori V复制子质粒的拷贝数，特别适合于各种不稳定 DNA 或毒性基因的克隆。 [mcrA,Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)]基因型使EPI300菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA（例如：哺乳动物基因组DNA）。recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。lacZΔM15 标记的存在使EPI300可用于蓝白斑筛选，rpsL赋予其链霉素抗性。EPI300感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒（2686bp，Amp^R）检测转化效率>3×10⁸cfu/μg DNA。

操作方法

1. EPI300感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底混匀，冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。

4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或

LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15 h。

WDEPI-诱导剂使用方法

     为了克隆毒性基因，EPI300 菌株通过改造 pcnB 基因（控制质粒拷贝数的关键基因），在未诱导条件下可显著降低质粒拷贝数，减弱基因毒性，使EPI300细胞可以稳定维持含毒性基因或不稳定 DNA 片段的质粒；在需要提取质粒时，通过在培养基中添加诱导剂，可以快速诱导质粒至高拷贝状态，实现“低拷贝稳定保存、高拷贝大量提取”的灵活调控，质粒产量可比未诱导时提高 10-100 倍。EPI300、EPI400、IPC100、IPC200这四个菌株克隆毒性基因的原理类似，使用相同的诱导剂进行诱导，与其对应的是WDEPI-诱导剂系列。

     唯地生物开发了三种WDEPI-诱导剂，分别是WDEPI-诱导剂Ⅰ（货号：DL1105）、WDEPI-诱导剂Ⅱ（货号：DL1106）、WDEPI-诱导剂Ⅲ（货号：DL1107），WDEPI-诱导剂Ⅱ是WDEPI-诱导剂Ⅰ的优化版本，质粒产量比诱导剂Ⅰ的诱导效果提高1-2倍；诱导剂Ⅲ为诱导剂Ⅱ的优化版本，质粒产量比诱导剂Ⅱ的诱导效果再提高30%，使用方法略有不同，参考各诱导剂说明书使用。

注意事项

1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。