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WB800 感受态细胞	Bsc1035S	10×100μl	pHT10 (control vector, 10ng/μl)  10μl×1支
			枯草孵育培养基BsLB  500μl×1支
	Bsc1035M	50×100μl	pHT10 (control vector, 10ng/μl)  10μl×1支
			枯草孵育培养基BsLB  1.5ml×1支

基因型

trpC2 ΔnprE ΔaprE Δepr Δbpr Δmpr::ble ΔnprB::bsr Δvpr wprA::hyg

产品说明

枯草芽孢杆菌是革兰氏阳性菌，细胞壁不含脂多糖（LPS），表达的蛋白无需额外去除内毒素，适合医药或食品级应用；天然具有高效的分泌系统，可将目标蛋白直接分泌到培养基中，简化纯化步骤；多数情况下无包涵体问题，表达的可溶性蛋白正确折叠，尤其适合含二硫键的蛋白（胞外环境有助于氧化折叠）；培养简单，生长快，普通LB培养基、37℃振荡即可快速生长，发酵工艺成熟。WB800菌株是常用的多重蛋白酶缺陷株，是WB600的衍生菌株，比WB600多敲除两个蛋白酶，共有8个主要蛋白酶基因被突变，其胞外蛋白酶活性仅剩野生型的0.06%，能有效减少外源蛋白被降解，提高外源蛋白产量和稳定性。WB800的trpC 基因发生 3 bp 缺失突变，突变后菌株无法自身合成色氨酸（由于编码区缺失了3个碱基ATT，trpC基因编码的蛋白质在第110和111位氨基酸位置，由原来的两个异亮氨酸减少为一个异亮氨酸）。WB800基因组中整合了一个博来霉素抗性基因，一个杀稻瘟素抗性基因，一个潮霉素抗性基因，有博来霉素、杀稻瘟素、潮霉素抗性，同时WB800基因组中有氯霉素抗性基因，不可转化氯霉素抗性质粒。 唯地生物开发的WB800化转感受态细胞只能用于热激转化，不能用于电击转化，经特殊工艺制作，pP43NMK质粒（7683bp）检测转化效率>1×10² cfu/μg DNA。

操作方法

1. WB800感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，待感受态融化，加入目的质粒并用手拨打EP管底混匀。

2. EP管插入浮漂中，放37℃孵育1小时。

3. 每管加入20ul枯草孵育培养基BsLB，混匀后继续放37℃孵育1-2小时。

4. 拿出EP管，5000 rpm离心一分钟收菌，留取50 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的LB平板上。将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养至少15小时。

抗生素使用浓度

1. WB800具有氯霉素抗性，不适合转化氯霉素抗性的枯草芽孢杆菌质粒。

2. 卡那抗性的枯草芽孢杆菌表达质粒（PMA5、pP43NMK【唯地货号：PB1101、PB1121】等）使用硫酸卡那霉素进行筛选，WB800使用的筛选浓度是50ug/ml(卡那霉素溶液唯地货号：YC9020L)。

3. 不同枯草菌株对抗生素的敏感度不同，不同质粒表达抗性基因的强度有差异，若使用新的质粒转化枯草菌株，所用的抗生素浓度需要做梯度试验确定。

LB液体培养基（货号: CM1010L）;LB 固体培养基（货号: CM1010S）。

注意事项

1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA，长时间存放会降低转化效率。

2. 加入枯草孵育培养基BsLB后，孵育2小时的转化效率相比孵育1小时可提高30%。

3. 枯草芽孢杆菌表达系统可用ITPG诱导型质粒或木糖诱导型质粒，当用IPTG诱导时，尽量使用不含乳糖的原料，若原料（蛋白胨，酵母粉等）中含有乳糖，会有严重的泄露表达（泄露表达是指不加诱导剂时目标蛋白的背景表达，大部分时候不影响试验）。