根瘤菌感受态细胞
产品规格（CAT#: RhC1011）
费氏中华根瘤菌 Sinorhizobium fredii： 100μl/支
pCAMBIA2301 (control vector, 10ng/μl): 10μl
保存条件(保质期)： -80℃（12个月）
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产品名称 |
产品货号 |
产品规格 |
说明书下载 |
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费氏中华根瘤菌 Sinorhizobium fredii 感受态细胞 |
RhC1011S |
10×100ul |
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| RhC1011M | 50×100ul |
产品说明
费氏中华根瘤菌 Sinorhizobium fredii，是由我国根瘤菌奠基人陈文新团队于 1988 年正式定名，是中华根瘤菌属（Sinorhizobium） 的代表物种，为我国本土特有快生型大豆根瘤菌。宿主来源：天然共生宿主以栽培大豆为主，侵染大豆根系形成根瘤；部分菌株可侵染豇豆、野大豆等其他豆科植物，宿主范围更广。土壤生境：核心分布区：我国黄淮海、华北、西北盐碱 / 石灰性旱地土壤（山西、山东、河南、新疆等），是北方碱性农田中优势土著大豆根瘤菌，耐盐碱能力突出。分离方式：从大豆田间土壤、大豆新鲜根瘤组织中分离纯化得到；商用菌株为实验室保藏驯化菌株，原始分离自国内大豆种植区土壤 / 根瘤。生长特征：属于快生型根瘤菌，YMA 培养基 28℃培养 2–3 天即可长出单菌落，区别于慢生根瘤菌 5–7 天的生长周期。费氏中华根瘤菌 Sinorhizobium fredii主要用于固氮研究和根际微生物与植物的互作研究。唯地生产的费氏中华根瘤菌 Sinorhizobium fredii化学转化感受态细胞经特殊工艺制作，pCAMBIA2301质粒（12739bp，KanR）检测转化效率>3×102 cfu/μg DNA。
操作方法
1. 取-80℃保存的根瘤菌感受态插入冰中。
2. 感受态融化后，每100 μl感受态加入0.1-5 μg质粒DNA，用手拨打管底混匀，依次于冰上静置5分钟、液氮5分钟、37℃水浴5分钟、冰浴5分钟。
3. 加入1 mL无抗生素的YMB液体培养基，于28℃振荡培养2~3小时。
4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取50 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的YMA平板上，倒置放于28℃培养箱培养3-4天。
（当平板只含有30 μg/ml kan 时，28℃培养48-72 h可看到小菌落；培养72-96h收平板可放4度保存2-3周。根瘤菌涂板一般用YMA培养基（唯地货号：RHM1012S）；根瘤菌液体培养基一般用YMB培养基（唯地货号：RHM1012L）;转化卡那抗性的质粒用硫酸卡那霉素（唯地货号：YC9020L）的浓度一般为30ug/ml。
注意事项
1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转化效率急剧下降；质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级；混入质粒时应轻柔操作，转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
2. 平板上阳性克隆密度过大时，由于营养不足，阳性克隆生长变慢，菌落变小，为了获得大的菌落，应减少质粒用量。
3. 硫酸卡那霉素浓度不应高于30 μg/ml，过高的抗生素浓度不利于根瘤菌生长，会降低其生长速度和转化效率。本公司费氏中华根瘤菌 Sinorhizobium fredii感受态计算转化效率时所用平板只含有30 μg/ml kan，不同复制子质粒或不同筛选抗性质粒转化根瘤菌后的平板中的抗生素浓度需要实验者做梯度试验确定。
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产品名称 |
产品货号 |
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费氏中华根瘤菌 Sinorhizobium fredii 感受态细胞 |
RhC1011S |
10×100ul |
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| RhC1011M | 50×100ul |
产品说明
费氏中华根瘤菌 Sinorhizobium fredii，是由我国根瘤菌奠基人陈文新团队于 1988 年正式定名，是中华根瘤菌属（Sinorhizobium） 的代表物种，为我国本土特有快生型大豆根瘤菌。宿主来源：天然共生宿主以栽培大豆为主，侵染大豆根系形成根瘤；部分菌株可侵染豇豆、野大豆等其他豆科植物，宿主范围更广。土壤生境：核心分布区：我国黄淮海、华北、西北盐碱 / 石灰性旱地土壤（山西、山东、河南、新疆等），是北方碱性农田中优势土著大豆根瘤菌，耐盐碱能力突出。分离方式：从大豆田间土壤、大豆新鲜根瘤组织中分离纯化得到；商用菌株为实验室保藏驯化菌株，原始分离自国内大豆种植区土壤 / 根瘤。生长特征：属于快生型根瘤菌，YMA 培养基 28℃培养 2–3 天即可长出单菌落，区别于慢生根瘤菌 5–7 天的生长周期。费氏中华根瘤菌 Sinorhizobium fredii主要用于固氮研究和根际微生物与植物的互作研究。唯地生产的费氏中华根瘤菌 Sinorhizobium fredii化学转化感受态细胞经特殊工艺制作，pCAMBIA2301质粒（12739bp，KanR）检测转化效率>3×102 cfu/μg DNA。
操作方法
1. 取-80℃保存的根瘤菌感受态插入冰中。
2. 感受态融化后，每100 μl感受态加入0.1-5 μg质粒DNA，用手拨打管底混匀，依次于冰上静置5分钟、液氮5分钟、37℃水浴5分钟、冰浴5分钟。
3. 加入1 mL无抗生素的YMB液体培养基，于28℃振荡培养2~3小时。
4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取50 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的YMA平板上，倒置放于28℃培养箱培养3-4天。
（当平板只含有30 μg/ml kan 时，28℃培养48-72 h可看到小菌落；培养72-96h收平板可放4度保存2-3周。根瘤菌涂板一般用YMA培养基（唯地货号：RHM1012S）；根瘤菌液体培养基一般用YMB培养基（唯地货号：RHM1012L）;转化卡那抗性的质粒用硫酸卡那霉素（唯地货号：YC9020L）的浓度一般为30ug/ml。
注意事项
1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转化效率急剧下降；质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级；混入质粒时应轻柔操作，转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
2. 平板上阳性克隆密度过大时，由于营养不足，阳性克隆生长变慢，菌落变小，为了获得大的菌落，应减少质粒用量。
3. 硫酸卡那霉素浓度不应高于30 μg/ml，过高的抗生素浓度不利于根瘤菌生长，会降低其生长速度和转化效率。本公司费氏中华根瘤菌 Sinorhizobium fredii感受态计算转化效率时所用平板只含有30 μg/ml kan，不同复制子质粒或不同筛选抗性质粒转化根瘤菌后的平板中的抗生素浓度需要实验者做梯度试验确定。
