根瘤菌感受态细胞
产品规格（CAT#: RhC1021）
大豆根瘤菌Bradyrhizobium japonicum USDA 110： 100μl/支
pCAMBIA2301 (control vector, 10ng/μl): 10μl
保存条件(保质期)： -80℃（12个月）
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产品名称 |
产品货号 |
产品规格 |
说明书下载 |
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大豆根瘤菌Bradyrhizobium japonicum USDA 110 感受态细胞 |
RhC1021S |
10×100ul |
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| RhC1021M | 50×100ul |
产品说明
大豆根瘤菌Bradyrhizobium japonicum USDA 110，原学名：Bradyrhizobium japonicum，现修订正式学名为：Bradyrhizobium diazoefficiens USDA 110，属慢生大豆根瘤菌，培养 5–7 天，适配酸性土壤，国际标准模式菌株。菌株编号 USDA 代表美国农业部（United States Department of Agriculture），是美国农业部根瘤菌资源库经典标准菌株，20 世纪中期从美国本土大豆种植田的大豆新鲜根瘤组织中分离纯化得到。天然宿主为栽培大豆（Glycine max），仅能高效与大豆结瘤固氮；原始菌株分离自北美中性偏酸农田土壤，全球温带酸性、微酸性大豆产区广泛适配，在高盐 / 高碱环境下生长、结瘤能力显著下降。生长特征：属于典型的慢生型根瘤菌，YMA 培养基 28℃培养 5–7 天长出单菌落，区别于快生根瘤菌 2–3 天的生长周期。大豆根瘤菌Bradyrhizobium japonicum USDA 110主要用于固氮研究和根际微生物与植物的互作研究。唯地生产的大豆根瘤菌Bradyrhizobium japonicum USDA 110化学转化感受态细胞经特殊工艺制作，pCAMBIA2301质粒（12739bp，KanR）检测转化效率>3×102 cfu/μg DNA。
操作方法
1. 取-80℃保存的根瘤菌感受态插入冰中。
2. 感受态融化后，每100 μl感受态加入0.1-5 μg质粒DNA，用手拨打管底混匀，依次于冰上静置5分钟、液氮5分钟、37℃水浴5分钟、冰浴5分钟。
3. 加入1 mL无抗生素的YMB液体培养基，于28℃振荡培养3~4小时。
4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取50 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的YMA平板上，倒置放于28℃培养箱培养5-7天。
（当平板只含有30 μg/ml kan 时，28℃培养5 - 6天可看到小菌落；培养6 - 9天收平板可放4度保存2-3周。根瘤菌涂板一般用YMA培养基（唯地货号：RHM1012S）；根瘤菌液体培养基一般用YMB培养基（唯地货号：RHM1012L）;转化卡那抗性的质粒用硫酸卡那霉素（唯地货号：YC9020L）的浓度一般为30ug/ml。
注意事项
1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转化效率急剧下降；质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级；混入质粒时应轻柔操作，转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
2. 平板上阳性克隆密度过大时，由于营养不足，阳性克隆生长变慢，菌落变小，为了获得大的菌落，应减少质粒用量。
3. 硫酸卡那霉素浓度不应高于30 μg/ml，过高的抗生素浓度不利于根瘤菌生长，会降低其生长速度和转化效率。本公司大豆根瘤菌Bradyrhizobium japonicum USDA 110感受态计算转化效率时所用平板只含有30 μg/ml kan，不同复制子质粒或不同筛选抗性质粒转化根瘤菌后的平板中的抗生素浓度需要实验者做梯度试验确定。
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产品货号 |
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大豆根瘤菌Bradyrhizobium japonicum USDA 110 感受态细胞 |
RhC1021S |
10×100ul |
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产品说明
大豆根瘤菌Bradyrhizobium japonicum USDA 110，原学名：Bradyrhizobium japonicum，现修订正式学名为：Bradyrhizobium diazoefficiens USDA 110，属慢生大豆根瘤菌，培养 5–7 天，适配酸性土壤，国际标准模式菌株。菌株编号 USDA 代表美国农业部（United States Department of Agriculture），是美国农业部根瘤菌资源库经典标准菌株，20 世纪中期从美国本土大豆种植田的大豆新鲜根瘤组织中分离纯化得到。天然宿主为栽培大豆（Glycine max），仅能高效与大豆结瘤固氮；原始菌株分离自北美中性偏酸农田土壤，全球温带酸性、微酸性大豆产区广泛适配，在高盐 / 高碱环境下生长、结瘤能力显著下降。生长特征：属于典型的慢生型根瘤菌，YMA 培养基 28℃培养 5–7 天长出单菌落，区别于快生根瘤菌 2–3 天的生长周期。大豆根瘤菌Bradyrhizobium japonicum USDA 110主要用于固氮研究和根际微生物与植物的互作研究。唯地生产的大豆根瘤菌Bradyrhizobium japonicum USDA 110化学转化感受态细胞经特殊工艺制作，pCAMBIA2301质粒（12739bp，KanR）检测转化效率>3×102 cfu/μg DNA。
操作方法
1. 取-80℃保存的根瘤菌感受态插入冰中。
2. 感受态融化后，每100 μl感受态加入0.1-5 μg质粒DNA，用手拨打管底混匀，依次于冰上静置5分钟、液氮5分钟、37℃水浴5分钟、冰浴5分钟。
3. 加入1 mL无抗生素的YMB液体培养基，于28℃振荡培养3~4小时。
4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取50 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的YMA平板上，倒置放于28℃培养箱培养5-7天。
（当平板只含有30 μg/ml kan 时，28℃培养5 - 6天可看到小菌落；培养6 - 9天收平板可放4度保存2-3周。根瘤菌涂板一般用YMA培养基（唯地货号：RHM1012S）；根瘤菌液体培养基一般用YMB培养基（唯地货号：RHM1012L）;转化卡那抗性的质粒用硫酸卡那霉素（唯地货号：YC9020L）的浓度一般为30ug/ml。
注意事项
1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转化效率急剧下降；质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级；混入质粒时应轻柔操作，转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
2. 平板上阳性克隆密度过大时，由于营养不足，阳性克隆生长变慢，菌落变小，为了获得大的菌落，应减少质粒用量。
3. 硫酸卡那霉素浓度不应高于30 μg/ml，过高的抗生素浓度不利于根瘤菌生长，会降低其生长速度和转化效率。本公司大豆根瘤菌Bradyrhizobium japonicum USDA 110感受态计算转化效率时所用平板只含有30 μg/ml kan，不同复制子质粒或不同筛选抗性质粒转化根瘤菌后的平板中的抗生素浓度需要实验者做梯度试验确定。
