苏云金芽孢杆菌感受态细胞
产品规格 （CAT#:BTE1020）
苏云金芽孢杆菌以色列亚种: 100μl/支 保存： -80℃（6个月）
pHT20 (control vector, 10 ng/μl) 10μl 保存：-80℃（6个月）
Bt孵育培养基BtB 5ml/20ml 保存：常温（6个月）
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产品名称 |
产品货号 |
产品规格 |
说明书下载 |
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电转苏云金芽孢杆菌以色列亚种 感受态细胞 |
BTE1020S |
5×100μl |
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| BTE1020M | 20×100μl |
产品说明
苏云金芽孢杆菌以色列亚种电击感受态细胞只能用于电击转化，不能用于热激转化。苏云金芽孢杆菌以色列亚种(Bacillus thuringiensis subsp. israelensis)菌株的CGMCC编号为CGMCC 1.1754，最早由中山大学/中国科学院微生物研究所提供，收录时间为1985-1-3。苏云金芽孢杆菌以色列亚种的主要用途：产生杀蚊毒素。唯地生物开发的苏云金芽孢杆菌以色列亚种电击感受态细胞可适用于各种大小质粒(5kb-60kb)的转化，经特殊工艺制作，pHT20质粒（ErmR）检测转化效率>104 cfu/μg DNA。
操作方法
质粒准备（去除甲基化）：将待转化质粒转入WD026感受态【唯地货号：DL5001】或JM110感受态【唯地货号：DL1025】，从WD026或JM110菌中提取质粒，用ddH2O溶解质粒，质粒浓度控制在200-500ng/ul。
附言：WD026是JM108的衍生菌株，集合了JM110、JM108两个菌株的优点，从中提取的质粒转化效率更高。
1. 取适量BtB孵育培养基放30度预热1小时（每管感受态准备1ml ）。
2. 0.2 cm 电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟沥干水分，正置5分钟，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电击杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖，冰中静置5分钟充分降温。
3. 取-80℃保存的苏云金芽孢杆菌电击感受态细胞插入冰中5 分钟，待其融化，加入目的DNA，并用手拨打EP管底轻轻混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。DNA样品的离子浓度越低，转化效率越高。离子浓度较高的DNA溶液或反应体系请用膜纯化或乙醇沉淀法纯化DNA，ddH2O溶解后电击转化。
4. 用200 μl枪头(用刀切除0.5cm枪尖)将感受态-DNA混合物快速移到电击杯中（避免产生气泡），轻轻晃动使液面保持水平状态，盖上杯盖，插入冰中。
5. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=2.2 kV，将电击杯从冰中拿出，用吸水纸擦拭表面，吸干表面水渍，放入电转槽中，电击完成后拿出电转杯放室温，打开杯盖，尽快内加入1ml预热的BtB孵育液，用1ml 枪吹吸电击杯底部2-3次，混匀后转移到5-50 ml透气试管中，30℃，225 rpm复苏3 小时。
6. 5000 rpm离心一分钟收菌，重悬后取100-200 μl涂布到含相应抗生素的LB平板上，30°C 倒置培养过夜。感受态包装内的标准质粒pHT20为红霉素抗性，若转化此质粒，平板应含有红霉素3ug/ml【唯地货号：YC9081L】。
7. 对于不确定转化效率的感受态或质粒需梯度稀释后涂板，可用LB液体进行 10 倍系列稀释（如 10-¹、10-²），避免菌液浓度过高导致平板菌落重叠。
8. 红霉素浓度选择：苏云金芽孢杆菌质粒多用红霉素筛选，不同质粒的红霉素表达框不同，表达强弱有差异，一般红霉素可用范围在2-5ug/ml之间，如果抑制不住不含质粒的细胞生长可适当调高红霉素浓度到5-15ug/ml。
抗生素使用方法
1. 加入DNA时体积不应大于感受态体积的1/10。典型的苏云金芽孢杆菌菌落乳白色、扁平、边缘不整齐。
2. 电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡，气泡会增加弧光放电风险。每个电击杯最多用5次。
3. 当DNA不纯或存在盐，乙醇，蛋白及缓冲液等污染时，转化效率急剧下降。
4. 电击杯里的离子可增加溶液的电导，增大在含有细胞和DNA的溶液中产生电流和弧光放电的风险。
5. 若转化大质粒或想获得较高转化效率，推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取。质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
6. 混入质粒时应轻柔操作，吸取感受态细胞时避免用力过猛，以免剪切力过大损伤细胞膜，降低转化效率。转化高浓度的质粒或连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
7. 电击感受态细胞最好保存在-80℃以下，高于-80℃超期储存会导致转化效率下降。
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产品名称 |
产品货号 |
产品规格 |
说明书下载 |
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电转苏云金芽孢杆菌以色列亚种 感受态细胞 |
BTE1020S |
5×100μl |
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| BTE1020M | 20×100μl |
产品说明
苏云金芽孢杆菌以色列亚种电击感受态细胞只能用于电击转化，不能用于热激转化。苏云金芽孢杆菌以色列亚种(Bacillus thuringiensis subsp. israelensis)菌株的CGMCC编号为CGMCC 1.1754，最早由中山大学/中国科学院微生物研究所提供，收录时间为1985-1-3。苏云金芽孢杆菌以色列亚种的主要用途：产生杀蚊毒素。唯地生物开发的苏云金芽孢杆菌以色列亚种电击感受态细胞可适用于各种大小质粒(5kb-60kb)的转化，经特殊工艺制作，pHT20质粒（ErmR）检测转化效率>104 cfu/μg DNA。
操作方法
质粒准备（去除甲基化）：将待转化质粒转入WD026感受态【唯地货号：DL5001】或JM110感受态【唯地货号：DL1025】，从WD026或JM110菌中提取质粒，用ddH2O溶解质粒，质粒浓度控制在200-500ng/ul。
附言：WD026是JM108的衍生菌株，集合了JM110、JM108两个菌株的优点，从中提取的质粒转化效率更高。
1. 取适量BtB孵育培养基放30度预热1小时（每管感受态准备1ml ）。
2. 0.2 cm 电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟沥干水分，正置5分钟，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电击杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖，冰中静置5分钟充分降温。
3. 取-80℃保存的苏云金芽孢杆菌电击感受态细胞插入冰中5 分钟，待其融化，加入目的DNA，并用手拨打EP管底轻轻混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。DNA样品的离子浓度越低，转化效率越高。离子浓度较高的DNA溶液或反应体系请用膜纯化或乙醇沉淀法纯化DNA，ddH2O溶解后电击转化。
4. 用200 μl枪头(用刀切除0.5cm枪尖)将感受态-DNA混合物快速移到电击杯中（避免产生气泡），轻轻晃动使液面保持水平状态，盖上杯盖，插入冰中。
5. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=2.2 kV，将电击杯从冰中拿出，用吸水纸擦拭表面，吸干表面水渍，放入电转槽中，电击完成后拿出电转杯放室温，打开杯盖，尽快内加入1ml预热的BtB孵育液，用1ml 枪吹吸电击杯底部2-3次，混匀后转移到5-50 ml透气试管中，30℃，225 rpm复苏3 小时。
6. 5000 rpm离心一分钟收菌，重悬后取100-200 μl涂布到含相应抗生素的LB平板上，30°C 倒置培养过夜。感受态包装内的标准质粒pHT20为红霉素抗性，若转化此质粒，平板应含有红霉素3ug/ml【唯地货号：YC9081L】。
7. 对于不确定转化效率的感受态或质粒需梯度稀释后涂板，可用LB液体进行 10 倍系列稀释（如 10-¹、10-²），避免菌液浓度过高导致平板菌落重叠。
8. 红霉素浓度选择：苏云金芽孢杆菌质粒多用红霉素筛选，不同质粒的红霉素表达框不同，表达强弱有差异，一般红霉素可用范围在2-5ug/ml之间，如果抑制不住不含质粒的细胞生长可适当调高红霉素浓度到5-15ug/ml。
抗生素使用方法
1. 加入DNA时体积不应大于感受态体积的1/10。典型的苏云金芽孢杆菌菌落乳白色、扁平、边缘不整齐。
2. 电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡，气泡会增加弧光放电风险。每个电击杯最多用5次。
3. 当DNA不纯或存在盐，乙醇，蛋白及缓冲液等污染时，转化效率急剧下降。
4. 电击杯里的离子可增加溶液的电导，增大在含有细胞和DNA的溶液中产生电流和弧光放电的风险。
5. 若转化大质粒或想获得较高转化效率，推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取。质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
6. 混入质粒时应轻柔操作，吸取感受态细胞时避免用力过猛，以免剪切力过大损伤细胞膜，降低转化效率。转化高浓度的质粒或连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
7. 电击感受态细胞最好保存在-80℃以下，高于-80℃超期储存会导致转化效率下降。
