解脂耶氏酵母感受态细胞
产品规格 （CAT#: YLC1001）
解脂耶氏酵母pof1 Competent Cell: 100μl/支 保存： -80℃（3个月）
pINA1269 (control vector, 10 ng/μl) 10μl 保存：-80℃（12个月）
Carrier DNA (10 μg/μl) 100μl 保存：-20℃（12个月）
PEG/LiAC: 5ml 保存： 4℃（12个月）
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产品名称 |
产品货号 |
产品规格 |
说明书下载 |
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解脂耶氏酵母pof1 感受态细胞 |
YLC1001S |
10×100ul |
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| YLC1001M | 50×100ul |
基因型
MATa ura3-302 leu2-270 xpr2-322 axp2-deltaNU49 XPR2::SUC2
产品说明
解脂耶氏酵母pof1（Yarrowia lipolytica ATCC MYA-2613）菌株是源自野生型菌株 W29（ATCC 20460）的工程菌株。因其遗传背景清晰且具备多重优良特性，pof1已成为当前合成生物学、代谢工程及工业发酵领域应用最广泛的解脂耶氏酵母宿主之一。该菌株的 xpr2-322 和 axp2-deltaNU49 突变导致其无法产生主要的胞外蛋白酶。这使其在表达对蛋白酶敏感的重组蛋白时具有显著优势。pof1是尿嘧啶、亮氨酸双重营养缺陷型菌株，这一特性使其成为携带URA3或LEU2筛选标记的质粒或基因敲除盒的理想宿主，便于遗传操作和转化子筛选。pof1是严格好氧酵母：生长需要充足的氧气供应，倍增时间约 1.5–2 小时。po1f 因其强大的脂质代谢能力和高效的异源蛋白表达能力，被广泛应用于生物燃料、食品添加剂、医药及环保等领域：1，异源蛋白表达：用于生产工业酶和治疗性蛋白。2，代谢工程与合成生物学：作为底盘细胞，用于生产多种高价值化学品，如赤藓糖醇、α-法尼烯、β-胡萝卜素和β-紫罗兰酮等。3，油脂生产：作为一种产油酵母，可用于生产中性油脂和特种脂质。pINA1269、pYL1269GH、pYL1269FH质粒是解脂耶氏酵母pof1 的蛋白表达质粒，筛选标志为LEU，可用SD-LEU平板进行筛选。解脂耶氏酵母pof1 感受态细胞经特殊工艺制作，-80℃可保存三个月，pINA1269质粒（7257bp，AmpR）检测转化效率>103 cfu/μg DNA。
操作方法
1. 质粒扩繁：为消除质粒甲基化，提高转化效率，可先将解脂耶氏酵母质粒转入JM110大肠杆菌感受态（货号：DL1025），从JM110细胞中提取质粒做后续试验。
2. 质粒线性化：pINA1269、pYL1269GH、pYL1269FH质粒在转化前需要单酶切，线性化：取质粒5µg，Not I酶切1小时，回收（注意：质粒上只能有一个Not I酶切位点）。
3. Carrier DNA 的预处理：将Carrier DNA 插入95℃金属浴5 min或插入浮漂中95℃水浴3 min，加热后快速插入冰中。
4. 取100 µl冰上融化的解脂耶氏酵母pof1 感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒2-5 µg，预处理后的Carrier DNA 10 µl，PEG/LiAc 500 µl并吸打几次混匀，30℃水浴30 min (15 min时翻转6-8次混匀)。
5. 将管放42℃水浴30 min (15 min时翻转6-8次混匀)。
6. 5000 rpm离心 40 s弃上清，ddH2O 400 µl 重悬，离心 30s弃上清。
7. ddH2O 50 µl重悬，涂质粒筛选用：SD-Leu平板，29℃培养48-96 h。
质粒介绍
pINA1269（货号：PYL1001）， 是一个在解脂耶氏酵母（Yarrowia lipolytica）中广泛使用的单拷贝整合型表达质粒，内含一个组成型蛋白表达框：强组成型启动子hp4d，是驱动外源基因在解脂耶氏酵母中高水平表达的核心元件；XPR2终止子，来自碱性胞外蛋白酶基因的转录终止信号，确保外源基因转录的正确终止。
pINA1269FH（货号：PYL1003）， 由pINA1269改造，在MCS区含有flag和His标签，方便蛋白纯化和检测。
pINA1269GH（货号：PYL1005）， 由pINA1269改造，在MCS区含有eGFP和His标签，方便蛋白纯化和检测。
培养基
① 质粒筛选用：SD-Leu培养基 (1L)(唯地CAT#：YM3102):
Yeast Nitrogen base 6.7g
葡萄糖 20g
Dropout （即DO Supplement –Leu） 适量（按说明书）
补水到1L，调PH至5.8；
Agar 20g(for plates only)
121℃，15 min高压灭菌。
② 蛋白表达或发酵用：YPD + Ura (尿嘧啶) (1L):
YPD 50g (唯地CAT#：YM1010L)
Ura (尿嘧啶) 30mg (唯地CAT#：YC8061S)
补水到1L，调PH至6.2-6.4
121℃，15 min高压灭菌。
注意事项
1. 感受态细胞最好在冰上融化。
2. 转化高浓度的质粒DNA可相应减少最终用于涂板的菌量。
3. 解脂耶氏酵母pof1 酵母菌株对高温敏感，最适生长温度为27-30℃；高于31℃，生长速度和转化效率呈指数下降。
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产品货号 |
产品规格 |
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解脂耶氏酵母pof1 感受态细胞 |
YLC1001S |
10×100ul |
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| YLC1001M | 50×100ul |
基因型
MATa ura3-302 leu2-270 xpr2-322 axp2-deltaNU49 XPR2::SUC2
产品说明
解脂耶氏酵母pof1（Yarrowia lipolytica ATCC MYA-2613）菌株是源自野生型菌株 W29（ATCC 20460）的工程菌株。因其遗传背景清晰且具备多重优良特性，pof1已成为当前合成生物学、代谢工程及工业发酵领域应用最广泛的解脂耶氏酵母宿主之一。该菌株的 xpr2-322 和 axp2-deltaNU49 突变导致其无法产生主要的胞外蛋白酶。这使其在表达对蛋白酶敏感的重组蛋白时具有显著优势。pof1是尿嘧啶、亮氨酸双重营养缺陷型菌株，这一特性使其成为携带URA3或LEU2筛选标记的质粒或基因敲除盒的理想宿主，便于遗传操作和转化子筛选。pof1是严格好氧酵母：生长需要充足的氧气供应，倍增时间约 1.5–2 小时。po1f 因其强大的脂质代谢能力和高效的异源蛋白表达能力，被广泛应用于生物燃料、食品添加剂、医药及环保等领域：1，异源蛋白表达：用于生产工业酶和治疗性蛋白。2，代谢工程与合成生物学：作为底盘细胞，用于生产多种高价值化学品，如赤藓糖醇、α-法尼烯、β-胡萝卜素和β-紫罗兰酮等。3，油脂生产：作为一种产油酵母，可用于生产中性油脂和特种脂质。pINA1269、pYL1269GH、pYL1269FH质粒是解脂耶氏酵母pof1 的蛋白表达质粒，筛选标志为LEU，可用SD-LEU平板进行筛选。解脂耶氏酵母pof1 感受态细胞经特殊工艺制作，-80℃可保存三个月，pINA1269质粒（7257bp，AmpR）检测转化效率>103 cfu/μg DNA。
操作方法
1. 质粒扩繁：为消除质粒甲基化，提高转化效率，可先将解脂耶氏酵母质粒转入JM110大肠杆菌感受态（货号：DL1025），从JM110细胞中提取质粒做后续试验。
2. 质粒线性化：pINA1269、pYL1269GH、pYL1269FH质粒在转化前需要单酶切，线性化：取质粒5µg，Not I酶切1小时，回收（注意：质粒上只能有一个Not I酶切位点）。
3. Carrier DNA 的预处理：将Carrier DNA 插入95℃金属浴5 min或插入浮漂中95℃水浴3 min，加热后快速插入冰中。
4. 取100 µl冰上融化的解脂耶氏酵母pof1 感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒2-5 µg，预处理后的Carrier DNA 10 µl，PEG/LiAc 500 µl并吸打几次混匀，30℃水浴30 min (15 min时翻转6-8次混匀)。
5. 将管放42℃水浴30 min (15 min时翻转6-8次混匀)。
6. 5000 rpm离心 40 s弃上清，ddH2O 400 µl 重悬，离心 30s弃上清。
7. ddH2O 50 µl重悬，涂质粒筛选用：SD-Leu平板，29℃培养48-96 h。
质粒介绍
pINA1269（货号：PYL1001）， 是一个在解脂耶氏酵母（Yarrowia lipolytica）中广泛使用的单拷贝整合型表达质粒，内含一个组成型蛋白表达框：强组成型启动子hp4d，是驱动外源基因在解脂耶氏酵母中高水平表达的核心元件；XPR2终止子，来自碱性胞外蛋白酶基因的转录终止信号，确保外源基因转录的正确终止。
pINA1269FH（货号：PYL1003）， 由pINA1269改造，在MCS区含有flag和His标签，方便蛋白纯化和检测。
pINA1269GH（货号：PYL1005）， 由pINA1269改造，在MCS区含有eGFP和His标签，方便蛋白纯化和检测。
培养基
① 质粒筛选用：SD-Leu培养基 (1L)(唯地CAT#：YM3102):
Yeast Nitrogen base 6.7g
葡萄糖 20g
Dropout （即DO Supplement –Leu） 适量（按说明书）
补水到1L，调PH至5.8；
Agar 20g(for plates only)
121℃，15 min高压灭菌。
② 蛋白表达或发酵用：YPD + Ura (尿嘧啶) (1L):
YPD 50g (唯地CAT#：YM1010L)
Ura (尿嘧啶) 30mg (唯地CAT#：YC8061S)
补水到1L，调PH至6.2-6.4
121℃，15 min高压灭菌。
注意事项
1. 感受态细胞最好在冰上融化。
2. 转化高浓度的质粒DNA可相应减少最终用于涂板的菌量。
3. 解脂耶氏酵母pof1 酵母菌株对高温敏感，最适生长温度为27-30℃；高于31℃，生长速度和转化效率呈指数下降。
