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WM3064 感受态细胞	DL2012S	10×100ul
	DL2012M	50×100ul

基因型

thrB1004 pro thi rpsL hsdS lacZΔM15 RP4-1360Δ(araBAD)567ΔdapA1341::erm pir(wt)

产品说明

WM3064菌株是专用的接合菌株，染色体中整合了RP4 接合转移全套 tra 操纵子，可高效转移携带 oriT 的质粒，无需辅助菌即可完成双亲接合，促进目标质粒在接合菌株之间转移。同时WM3064菌株基因组中dapA基因被突变，无法自主合成DAP（一种细胞壁合成必需的前体物质），因此，WM3064在常规LB培养基中无法独立存活，必须依赖外源DAP补充或与其他菌株共生。在基因工程中，WM3064常被设计为供体菌，与受体菌（如根瘤菌、假单胞菌、弧菌、放线菌、蓝藻等难转化革兰氏阴性菌递送 oriT 质粒）进行DNA传递，通过短暂的DAP供应窗口完成质粒转移后自然消亡，避免污染风险。WM3064菌株可做蓝白斑筛选，具有链霉素抗性。唯地生物生产的 WM3064感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒（2686bp，Amp^R）检测转化效率>10⁸ cfu/μg DNA。

操作方法

附言：所有培养 WM3064 的液体、固体培养基必须添加 DAP。DAP 推荐终浓度：300 μM。DAP 配制：用水配 100 mM 母液，0.22 μm 过滤除菌，不可高压灭菌，-20℃避光分装保存。

1. WM3064感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA/质粒并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。

4. 5000 rpm离心1分钟收集菌体，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养（16-20 h）。

注意事项

1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA，长时间存放会降低转化效率。

2. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。

3. 若要获得大量，高纯度质粒，建议在TB培养基（唯地CAT#：CM1018L）中摇菌培养（以标准质粒PUC19为例：在TB营养液中过夜培养的菌体浓度和质粒产量为LB的3-4倍，SOC的2倍）