根瘤菌用YMA培养基 - 上海唯地生物技术有限公司

大肠杆菌/农杆菌培养基

培养基系列

根瘤菌用YMA培养基

产品说明

根瘤菌用YMA培养基，即酵母粉甘露醇琼脂培养基（Yeast Extract Mannitol Agar，YMA），主要用于发根农杆菌、根瘤菌、土壤农杆菌的分离、纯化、菌落鉴别、斜面保藏、平板计数试验。作用原理：仅农杆菌、根瘤菌可高效利用甘露醇，自带弱筛选效果；根瘤菌等目标菌代谢甘露醇产生有机酸，有机酸分泌到培养基中，溶解碳酸钙形成菌落外围透明圈；加入刚果红后：根瘤菌等目标菌落呈乳白色或淡红色，其他杂菌多呈现深红 / 玫红色，因此特别适用于根瘤菌，部分农杆菌的菌株分离、菌种鉴定、菌体扩繁试验。

产品规格

货号	规格	目录价
RHM1012S	250g/瓶	260

产品内容

包装名称	包装含量	包装数量	保存条件
根瘤菌用YMA培养基	250g	1瓶	室温干燥/24个月
1%刚果红母液（过滤除菌）	50ml	1瓶	4 ℃/24个月

产品组分与配方

产品组分	根瘤菌用YMA培养基配方g/L
酵母提取物	1.0g
甘露醇	10.0g
磷酸氢二钾	0.5g
无水硫酸镁	0.1g
氯化钠	0.1g
碳酸钙	1.0g
Agar （琼脂粉）	15.0g

附言：

1. 原始配方（Atlas，2004）含有200 mg/L MgSO₄*7H₂O，我们使用100 mg/L的无水MgSO₄。

2. YMB为YMA的液体培养基形式，主要用于扩繁，不用于菌株分离和鉴定，不含碳酸钙和刚果红。

3. 刚果红母液以无菌的液体形式提供，在YMA灭菌后冷却到50度以下加入培养基。刚果红终浓度 0.025 g/L。

PH值( 25°C)6.8±0.2，本产品加入PH7.0的去离子水后PH接近6.8，可不调ph值直接使用。

使用方法

1. 称量：称取本品干粉 27.7 g，加入 0.9 L 去离子水。

2. 溶解：搅拌或加热搅拌至培养基完全溶解，定容到1L。

3. 灭菌：分装至适当容器后，115℃高压灭菌15分钟（禁止 121 ℃，防止碳酸钙分解）。

4. 倒板：灭菌后冷却至约 45-50℃，摇匀后加入刚果红/抗生素，倒平板或摆斜面，凝固后即可使用。

培养条件与菌落特征

接种目标菌株，培养温度：28 ℃；培养时长：3–7 d ,典型菌落：乳白色或加刚果红后粉红色、光滑隆起、半透明，外圈有清晰碳酸钙透明水解圈。

质控菌株培养：放置 30℃需氧培养 5d。

菌株	ATCC编号	菌株生长情况
苜蓿根瘤菌	ATCC9930	+++
大豆根瘤菌	ATCC10004	+++

刚果红使用方法

YMA里加刚果红（常用终浓度0.025 g/L，即 0.0025% ；1L YMA培养基中加原液2.5ml），是鉴别显色助剂，用来快速区分根瘤菌目标菌落与土壤 / 根瘤中的杂菌、部分农杆菌等干扰菌。

显色原理

染料吸附差异机制：刚果红可结合菌体表面多糖、纤维素类胞外聚合物；不同菌表面组分差异巨大：
慢生根瘤菌（Bradyrhizobium，大豆慢生型）：几乎不吸附刚果红 → 菌落乳白色 / 奶白色，或浅红色；
快生根瘤菌（Rhizobium，苜蓿、蚕豆、三叶草等）：粉色，极少深红；
杂菌（芽孢杆菌、霉菌、土壤普通革兰氏阴性菌）、部分农杆菌：强吸附染料 → 菌落明显深红 / 玫红。

辅助分型：快慢生根瘤菌之间吸色深浅也有细微区别，可做简易表型初筛标记。

注意事项

- 高温会破坏碳酸钙鉴别体系，严格控温115℃灭菌；抗生素、刚果红均不耐高温，必须灭菌后再加。

- 高温、长时间灭菌会导致培养基颜色变深，营养降解，影响菌落形态分化。

- 平板 4 ℃避光可短期保存 14 d 左右。

- 本品仅供微生物实验科研使用，不可用于临床诊断、食品、药品治疗。