产品规格和内容

产品性质

产品组分与配方

适用试验

植物转基因筛选：农杆菌介导转化、基因枪转化后的愈伤组织/植株筛选

哺乳动物细胞稳转株构建：HEK293、Hela、CHO等细胞株阳性克隆筛选

微生物筛选：酵母、细菌（携带neo抗性基因）的阳性克隆筛选

其他真核生物：原生动物、线虫等转基因个体筛选

推荐工作浓度（仅供参考，需预实验确定最优浓度）

使用方法

1. 储存液的配制（50mg/ml）：称取1g G418加入20ml 无菌的去离子水，摇晃混匀溶解，0.22μm滤膜过滤除菌，分装成单次使用的小包装，-20℃避光冻存可稳定保存两年，反复冻融会导致活性下降。

2. 常用筛选浓度：G418用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型、培养基、生长条件和细胞代谢率进行调整。

3. G418溶液不耐高温，在使用时若需加热培养基，待培养基温度降到55℃以下，再加入适量G418储存液，混匀后使用。

4. 对第一次使用的实验体系，建议通过制作杀灭曲线（kill curve）来确定最佳筛选浓度：

1）以水稻转基因试验为例：准备含设定浓度的筛选培养基，浓度设置为30μg/ml、40μg/ml、50μg/ml、60μg/ml、80μg/ml、100μg/ml六个梯度。

2）准备水稻胚状愈伤，每个浓度准备60个愈伤，做 3 个平行试验，每个试验做20个愈伤。

3）水稻胚状愈伤培养3-4周左右，约7天更换一次新鲜的筛选培养基。每日观察愈伤的生长情况。14-28天可以观察到死亡的愈伤，能够杀死水稻愈伤的最低浓度即为筛选用的工作浓度。

注意事项

1. G418固体、溶液不可高压灭菌。

2. G418固体、溶液不可放室温长期保存，可低温保存。

3. 注意无菌操作，避免污染。本产品对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。

4. 本产品仅供专业人员科研使用，不得用于临床诊断或治疗。

5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。