克隆感受态细胞
产品规格（CAT#: DL3046）
Ecn 1917(∆pMUT1)： 100μl/支
pUC19 (control vector，10pg/μl): 10μl
保存条件(保质期)： -80℃（6个月）
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产品名称 |
产品货号 |
产品规格 |
说明书下载 |
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Ecn 1917(∆pMUT1) 感受态细胞 |
DL3046S |
10×100ul |
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| DL3046M | 50×100ul |
基因型
E.coli Nissle 1917 O6:K5:H1 EndA+ Dam+ Dcm+ ∆pMUT1
产品说明
大肠杆菌菌株Nissle 1917是一种非致病的共生大肠杆菌分离物，1917年由德国微生物学家Alfred Nissle 从一名未感染痢疾的士兵肠道中分离出一株大肠杆菌，这个菌株可以作为药物治疗其他感染者，后来被命名为Nissle 1917，通常也缩写为EcN。EcN是一株未经过改造的野生型大肠杆菌菌株，不产生任何肠毒素或细胞毒素（肠毒素是由某些微生物产生的毒素，可引起胃肠道症状）。EcN 属血清O6:K5:H1型，其LPS侧链较短，且K5型夹膜具有血清敏感性，在体内易被血清清除，因此EcN不具致病性。EcN可以抑制肠道内病原菌的生长，防止病原菌在肠道内定植，同时具有抗炎作用。EcN在临床上主要用于胃肠功能障碍性疾病的治疗，例如克罗恩病、炎症性肠病及便秘等。本公司的Ecn 1917(∆pMUT1) 菌株是不含野生型辅助质粒pMUT1，含有野生型辅助质粒pMUT2的菌株，pMUT1质粒无已知功能，无明显的筛选标记，但在大肠杆菌中可稳定存在，可作为EcN菌株的鉴定标准质粒使用，唯地生物利用毒性基因替代法将这个质粒敲除，获得Ecn 1917(∆pMUT1) 菌株，常用作动物体内试验(激活T细胞、肿瘤治疗、靶向释放蛋白、抗动脉粥样硬化等试验)。Ecn 1917(∆pMUT1) 菌株的核酸酶endA1为野生型，体内核酸酶含量较高，提取质粒时务必使用质粒提取试剂盒中去蛋白液尽量去除核酸酶对质粒的污染，防止质粒降解；另外染色体中携带有功能的Dam、Dcm甲基化酶；不可用于蓝、白斑筛选。Ecn 1917(∆pMUT1) 感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒（2686bp，AmpR）检测转化效率>1×107 cfu/μg DNA。
操作方法
1. Ecn 1917(∆pMUT1) 感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的质粒，并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心1分钟收集菌体，留取100 μl左右上清重悬菌块并涂布到含相应抗生素的LB培养基上。
5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
Ecn 1917(∆pMUT1) 的优点
1. 遗传稳定性和操作简便性：消除内源质粒不兼容风险，pMut1有自己的复制子。当引入新的外源质粒时，可能会发生复制子不兼容，导致外源质粒无法稳定维持或被“排挤”掉。Ecn 1917(∆pMUT1)菌株减弱了这一风险，极大地提高了外源质粒的转化效率和稳定性。
2. 减少基因工具间的相互干扰：pMut1上携带的基因（如编码细菌素、调控蛋白等）可能会与引入的基因发生不可预测的交叉干扰。例如，它们可能表达某些调控蛋白，影响外源启动子的活性。Ecn 1917(∆pMUT1)菌株提供了一个相对“干净”的遗传背景。
3. 减少代谢负担，优化细胞性能：维持和复制质粒需要消耗宿主细胞的能量和资源。去除pMut1可以减轻细胞的代谢负担，提高外源蛋白表达量，这对于治疗性蛋白至关重要，通常能带来更高的生长速率和蛋白产量。
4. 增强生物安全性和环境可控性：防止基因水平转移，pMut1有可能转移到环境中的其他细菌（包括肠道内的益生菌、病原菌等）中。Ecn 1917(∆pMUT1)菌株的生物安全性更高。
注意事项
1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。混入目的DNA时应轻柔操作。
2. 若要获得大量，高纯度质粒，建议在TB培养基（唯地CAT#：CM1018L）中摇菌培养（以标准质粒PUC19为例：在TB营养液中过夜培养的菌体浓度和质粒产量为LB的3-4倍，SOC的2倍）。
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产品名称 |
产品货号 |
产品规格 |
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Ecn 1917(∆pMUT1) 感受态细胞 |
DL3046S |
10×100ul |
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| DL3046M | 50×100ul |
基因型
E.coli Nissle 1917 O6:K5:H1 EndA+ Dam+ Dcm+ ∆pMUT1
产品说明
大肠杆菌菌株Nissle 1917是一种非致病的共生大肠杆菌分离物，1917年由德国微生物学家Alfred Nissle 从一名未感染痢疾的士兵肠道中分离出一株大肠杆菌，这个菌株可以作为药物治疗其他感染者，后来被命名为Nissle 1917，通常也缩写为EcN。EcN是一株未经过改造的野生型大肠杆菌菌株，不产生任何肠毒素或细胞毒素（肠毒素是由某些微生物产生的毒素，可引起胃肠道症状）。EcN 属血清O6:K5:H1型，其LPS侧链较短，且K5型夹膜具有血清敏感性，在体内易被血清清除，因此EcN不具致病性。EcN可以抑制肠道内病原菌的生长，防止病原菌在肠道内定植，同时具有抗炎作用。EcN在临床上主要用于胃肠功能障碍性疾病的治疗，例如克罗恩病、炎症性肠病及便秘等。本公司的Ecn 1917(∆pMUT1) 菌株是不含野生型辅助质粒pMUT1，含有野生型辅助质粒pMUT2的菌株，pMUT1质粒无已知功能，无明显的筛选标记，但在大肠杆菌中可稳定存在，可作为EcN菌株的鉴定标准质粒使用，唯地生物利用毒性基因替代法将这个质粒敲除，获得Ecn 1917(∆pMUT1) 菌株，常用作动物体内试验(激活T细胞、肿瘤治疗、靶向释放蛋白、抗动脉粥样硬化等试验)。Ecn 1917(∆pMUT1) 菌株的核酸酶endA1为野生型，体内核酸酶含量较高，提取质粒时务必使用质粒提取试剂盒中去蛋白液尽量去除核酸酶对质粒的污染，防止质粒降解；另外染色体中携带有功能的Dam、Dcm甲基化酶；不可用于蓝、白斑筛选。Ecn 1917(∆pMUT1) 感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒（2686bp，AmpR）检测转化效率>1×107 cfu/μg DNA。
操作方法
1. Ecn 1917(∆pMUT1) 感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的质粒，并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心1分钟收集菌体，留取100 μl左右上清重悬菌块并涂布到含相应抗生素的LB培养基上。
5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
Ecn 1917(∆pMUT1) 的优点
1. 遗传稳定性和操作简便性：消除内源质粒不兼容风险，pMut1有自己的复制子。当引入新的外源质粒时，可能会发生复制子不兼容，导致外源质粒无法稳定维持或被“排挤”掉。Ecn 1917(∆pMUT1)菌株减弱了这一风险，极大地提高了外源质粒的转化效率和稳定性。
2. 减少基因工具间的相互干扰：pMut1上携带的基因（如编码细菌素、调控蛋白等）可能会与引入的基因发生不可预测的交叉干扰。例如，它们可能表达某些调控蛋白，影响外源启动子的活性。Ecn 1917(∆pMUT1)菌株提供了一个相对“干净”的遗传背景。
3. 减少代谢负担，优化细胞性能：维持和复制质粒需要消耗宿主细胞的能量和资源。去除pMut1可以减轻细胞的代谢负担，提高外源蛋白表达量，这对于治疗性蛋白至关重要，通常能带来更高的生长速率和蛋白产量。
4. 增强生物安全性和环境可控性：防止基因水平转移，pMut1有可能转移到环境中的其他细菌（包括肠道内的益生菌、病原菌等）中。Ecn 1917(∆pMUT1)菌株的生物安全性更高。
注意事项
1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。混入目的DNA时应轻柔操作。
2. 若要获得大量，高纯度质粒，建议在TB培养基（唯地CAT#：CM1018L）中摇菌培养（以标准质粒PUC19为例：在TB营养液中过夜培养的菌体浓度和质粒产量为LB的3-4倍，SOC的2倍）。
