产品规格

产品组分与配方

PH值( 25°C)：7.0±0.2，本产品加入PH7.0的去离子水后PH接近7.0，可不调ph值直接使用。

产品说明

     ZYM-5052 Broth：Studier 团队开发，是基于 “碳源自诱导” 原理设计的复合自诱导培养基。ZYM-5052 Broth参考LB配方，在其中补充适量的葡萄糖、乳糖、甘油、镁离子、钠离子、钾离子及微量元素，主要用于大肠杆菌中由T7启动子诱导蛋白表达的试验（或IPTG诱导蛋白表达的试验）。与传统的LB-IPTG蛋白诱导方法不同，自诱导培养基允许T7启动子系统的自动调节，诱导表达，无需检测培养基中菌体OD值，无需添加IPTG，并且蛋白表达量比IPTG诱导的蛋白量更高。

     自诱导培养基作用机制：在葡萄糖存在时，大肠杆菌优先利用葡萄糖，葡萄糖作为半乳糖操纵子的阻遏因子阻止细菌利用α-乳糖，促进高密度生长。一旦培养基中的葡萄糖被耗尽（通常发生在对数中后期），乳糖被ß-半乳糖苷酶转换成异乳糖（葡萄糖-1,6-半乳糖），而后者作为IPTG诱导型启动子的诱导剂，促进乳糖阻遏物从启动子的DNA结合位点上释放，启动重组蛋白的表达。对于含有DE3元件的大肠杆菌，异乳糖使T7lac启动子去阻遏，诱导lacUV5启动子表达T7 RNA聚合酶。通过这种方式，在原核表达菌生长到某一特定点时蛋白表达自发开始，无需监测细胞密度（OD600）和添加IPTG这两个步骤。与传统IPTG诱导的蛋白表达过程相比，使用自动诱导培养基极大地方便和简化了试验流程。注意：大肠杆菌表达菌株必须含有lac操纵子（包括lacY和lacZ），如BL21（DE3）、Rosetta（DE3）、TB1、Mg1655等；而T7 Express lysY等菌株不含完整的lac操纵子，不能使用自诱导培养基。

注意：哪种自诱导培养基更适合目标蛋白的表达需要做预试验确认，不同蛋白需要不同的自诱导培养基进行诱导表达，很难在诱导之前预测结果。

使用方法

     取ZYM-5052 Broth 粉剂培养基一袋，加双蒸水480ml溶解后，定容到480 ml，121℃-20min高压灭菌，灭菌后待温度降到60度以下，加入10ml 50×AIM碳源溶液，10ml 50×5052缓冲液，0.5ml 1000×微量元素溶液，0.5ml 1000×MgSO₄溶液混匀后即可使用或放室温保存。

蛋白自诱导方法：

1. 准备含有目的质粒的原核表达大肠杆菌单菌落（可质粒转化感受态涂板，也可平板划线）。

2. 小摇接菌：将单菌落接种到含有1-3ml 含相应抗生素的液体LB/2YT的透气试管中。

3. 37℃，200 rpm过夜摇菌约10-24h，菌体摇浓，一般要求OD600>2.0。

4. 按2-5%的比例接菌到ZYM-5052 Broth自诱导培养基中，

  A. 30-37度诱导：200-300rpm，摇菌8-24h。

  B. 18-25度诱导：200-300rpm，摇菌12-48h。

  C. 若所表达蛋白为毒性蛋白或菌体生长过慢，可先在37度摇菌，待菌体OD600=0.8左右时降低到目标温度开始诱导蛋白表达。

5. 最佳摇菌时间与所表达蛋白有关，为找到最佳诱导时间可在不同诱导时间点取样。

注意事项

1. ZYM-5052 Broth自诱导培养基需先补水，121℃-20min高压灭菌后使用；若发现有严重吸潮现象，停止使用。

2. 少部分蛋白用自诱导培养基的方法诱导蛋白可能不如常规IPTG诱导表达系统，遇到此类蛋白可使用常规的IPTG诱导方法。

3. 若配制少于0.5L，按每100ml加4.34g培养基的比例加入即可，剩余培养基封口后放干燥处保存。

4. 大肠杆菌表达菌株必须含有lac操纵子（包括lacY和lacZ），如BL21（DE3）、Rosetta（DE3）、TB1、Mg1655等；而T7 Express lysY等菌株不含完整的lac操纵子，不能使用自诱导培养基。