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大肠杆菌转化

转化后大量长菌,呈长融的态势

文字:[大][中][小] 2015-9-28    浏览次数:1338    

连接产物转化后大量长菌,完全是一种长融的态势,在转化前感受态DH5αAmp+,Kan+中都未能摇起来,说明感受态没有被污染,这是为什么?


答:每次实验中都应设有阳性对照以估计转化效率,设立阴性对照已消除可能的污染及查明失败的原因。出现上述情况,可能是菌量过多或者感受态细胞在操作过程中污染。请先确定不加DNA只有感受态细胞的阴性对照是否在抗性板上生长,以排除操作过程中抗生素失效或被有抗生素的菌株污染的情况;其次请转化酶切后的质粒作为另一个阴性对照,确定酶切是否完全。对于菌量过多的问题,就大多数克隆实验来说,50µl感受态已绰绰有余,如出现大片长融的状态,请适当减少感受态用量或涂板菌量。



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