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GT115

文字:[大][中][小] 2017-7-19    浏览次数:1688    

GT115 Chemically Competent Cell 产品说明书 




产品规格(CAT#: DL1090)

GT115:                                                      100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                   10μl

保存条件(保质期):                            -80℃(6个月) 



基因型

F- mcrA∆(mrr-hsdRMS-mcrBC) f80lacZDM15∆lacX74 recA1 rpsL (StrR) endA1 ∆dcm uidA(DMluI)::pir-116∆sbcC-sbcD


产品说明

GT115菌株,是专门用来克隆含有发夹结构(Hairpin)或重复序列等DNA二级结构的基因序列的大肠杆菌菌株。大肠杆菌中存在一种SbcCD蛋白复合体,可以识别DNA发夹结构,并将其切除;将sbcCsbcD两个基因突变,增强了发夹结构DNA的稳定性。同时在大肠杆菌基因组中引入uidA(DMluI)::pir-116,使GT115可以表达 兀 蛋白,含有R6Kg ori复制子的质粒( pCpG-mcs、pCpG-LacZ、pCpG-siRNA …)可以正常复制。该菌株还含有具有核酸酶 (endA)突变、重组酶 (recA)突变,增强了外源DNA的稳定性。GT115感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19检测转化效率>2×108 cfu/μg DNA。



操作方法

1. GT115感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打EP管底混匀(避免用枪吸打),冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰中并静置2分钟,晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入0.9 mL室温S.O.C.或LB培养基(S.O.C.营养丰富,可提高转化效率)。

4. 37℃,225 rpm复苏60分钟。

5. 5000 rpm离心1分钟收菌,留取100 μl左右上清吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的S.O.C. 或LB培养基上。

6. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。


 

注意事项

1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。混入目的DNA时应轻柔操作。转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。

2. 此菌株具有链霉素抗性,拥有这种抗性的质粒无法使用






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