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配套产品

PEG/LiAc

文字:[大][中][小] 2018-6-12    浏览次数:1110    

 PEG/LiAc 说明书




产品规格


产品名称

货号

规格

保存

PEG/LiAC

YC5001S

5 ml

4, 12个月

PEG/LiAC

YC5001M

50 ml

4, 12个月


产品说明


  PEG是一种高分子聚合物,只有分子量达到3000左右的PEG才会发挥最大的转化促进作用。酵母感受态细胞转化所需PEG分子量为4000,可促进酵母转化效率达到103-105 cfu/μg DNAPEG在酵母转化中起到在高浓度LiAc环境中保护细胞膜,减少LiAc对细胞膜结构损伤的作用;同时PEG可促使质粒更紧密贴附酵母细胞壁。LiAc可使酵母细胞产生一种短暂的感受性状态,此时酵母能够摄取外源性DNAPEG/LiAc是唯地生物生产的酵母感受态细胞转化所必需的配套试剂,每个转化反应需要500 µl PEG/LiAc 


操作方法


1. Carrier DNA 在每次使用前要通过加热处理使其变性为单链状态,步骤如下:Carrier DNA 95℃水浴或金属浴3 min,快速插入冰中,静置3 min,再次放95℃水浴或金属浴3 min,快速插入冰中,静置3 min以上。

2. 100 µl冰上融化的酵母感受态细胞,依次加入预冷的目的质粒2-5 µgCarrier DNA 10 µlPEG/LiAc 500 µl并吸打几次混匀,30℃水浴30 min (15 min时翻转6-8次混匀)

3. 将管放42℃水浴15 min (7.5 min时翻转6-8次混匀)

4. 5000 rpm离心 40 s弃上清,ddH2O 400 µl 重悬,离心 30s弃上清。

5. ddH2O 50 µl重悬,涂板,29℃培养48-96 h 


注意事项


1. PEG长时间静置易沉淀,在每次使用前务必摇晃,使试剂中各组分分布均匀。

2. PEG/LiAC 可在4℃长时间保存




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