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克隆感受态_热激

JM330

文字:[大][中][小] 2018-1-2    浏览次数:2606    

JM330 Chemically Competent Cell 产品说明书




产品规格(CAT#: DL2020)

JM330:                                                     100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                   10μl

保存条件(保质期):                            -80℃(6个月)



基因型


F- φ80 lacZ∆M15 ∆(lacZYA-argF)U169 recA1 endA1 hsdR17(rk-, mk+) phoA supE44 λ-thi-1 gyrA96 relA1 tonA


产品说明

JM330菌株(即DH5α T1 Phage Resistant),来源于DH5α菌株。在DH5α大肠杆菌基因组中引入tonA,赋予其抗噬菌体T1,T5的能力,即为JM330。JM330菌株最大的特点是其可以在体内特异性降解甲基化质粒模板,广泛应用于各种DNA定点突变试验中。JM330菌株缺失核酸内切酶 (endA1)和重组酶(recA1),提高了质粒DNA的产量和质量; lacZΔM15的存在使JM330可用于蓝、白斑筛选。唯地生物开发的JM330感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率>1×109 cfu/μg DNA。



操作方法

1. JM330感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA(例如:Dpn I消化产物等)并用手拨打EP管底混匀,冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (LB),混匀后37℃,200 rpm复苏70分钟。

4. 5000 rpm离心1分钟收集菌体,留取50 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱至少15小时。



注意事项

1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。

2. JM330可以对未被Dpn I降 解掉的质粒模板进行进一步的降解,因此可以保证定点突变具有更高的阳性率。

3. 转化高浓度的质粒或Dpn I消化产物可相应减少最终用于涂板的菌量。





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