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克隆感受态_热激

HB101

文字:[大][中][小] 2015-8-26    浏览次数:3677    

HB101 Chemically Competent Cell 产品说明书 



 

产品规格(CAT#: DL1060)

HB101:                                                     100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                   10μl

保存条件(保质期):                            -80℃(6个月) 



基因型

F- mcrB mrr hsdS20(rB- mB-) recA13 leuB6 ara-14 proA2 lacY1 galK2 xyl-5 mtl-1rpsL20((strR) glnV44λ-


产品说明

HB101菌株是 E. Coli K12菌株和 E. Coli B 菌株的杂合产物(同时也是Stbl3的原始菌株)。recA13突变可有效抑制长片段末端重复区的重组,降低错误重组的概率;但不含核酸酶endA1突变,体内核酸酶含量较高,提取质粒时务必使用质粒提取试剂盒中去蛋白液。hsdS20背景使HB101缺失内切酶系统,增强了外源DNA的稳定性和提取质量;此菌株具有链霉素抗性;不存在lacIqZΔM15,不可用于蓝、白斑筛选。HB101感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率>5×108cfu/μg DNA。 


操作方法

1. HB101感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰中静置25分钟。

2. 42水浴热激45秒,迅速放回冰中并静置2分钟,晃动会降低转化效率。

3.向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB),混匀后37℃,200 rpm复苏60分钟。

4. 5000 rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。


注意事项

1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化,插入冰中8钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。

2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。

3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。






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HB101 Chemically Competent Cell 产品说明书



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