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克隆感受态_热激

TOP10

文字:[大][中][小] 2015-8-26    浏览次数:6460    

TOP10 Chemically Competent Cell 产品说明书 




产品规格(CAT#: DL1010)

TOP10:                                                     100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                   10μl

保存条件(保质期):                            -80℃(6个月) 


基因型

F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacM15 ΔlacX74 recA1 araΔ139 Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL (StrR) endA1 nup



产品说明

TOP10菌株来源于MC1061菌株,是目前实验室最常用的感受态细胞之一,基因型与DH10B高度类似 (DH10B为galE15型,而TOP10为galU型)。TOP10生长速度快 (比DH5α快,但比Mach1-T1生长速度慢),10小时可见克隆,recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。可用于构建克隆,蓝白斑筛选等实验。TOP10感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率>5×108cfu/μg DNA。 


操作方法

1. TOP10感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA (质粒或连接产物) 并用手拨打EP管底轻轻混匀 (避免用枪吸打),冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基 (2YTLB),混匀后37℃,200 rpm复苏60分钟。

4. 5000rpm离心一分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YTLB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作,将平板放37℃培养至少13 h


注意事项

1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。

2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。

3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。




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TOP10 Chemically Competent Cell 产品说明书


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