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C58C1

2017-12-4

C58C1 Chemically Competent Cell

产品说明书



产品规格 (CAT#: AC1110)
C58C1:                                                               100μl/支
pCAMBI2301(control vector,10ng/μl )              10μl
保存条件(保质期):                                 -80℃(12个月)


基因型

Agrobacterium rhizogenes (strR,rifR ) pRiA4b (agropine type)


产品说明

发根农杆菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)农杆菌属(agrobacterium)的一种革兰氏阴性土壤细菌,它能够感染大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。C58C1发根农杆菌菌株含有pRiA4b农杆碱型Ri质粒,具有广泛的宿主范围(蔷薇科,夹竹桃科,豆科,茄科,黄芩,烟草等),同时具有链霉素,利福平抗性。本公司生产的C58C1化学转化感受态细胞经特殊工艺制作,pCAMBIA2301质粒(卡那霉素抗性)检测,转化效率>104 cfu/μg DNA。


常规操作方法

1.取-80℃保存的C58C1发根农杆菌感受态于室温或手心片刻待其部分融化,处于冰水混合状态时插入冰中。

2.  每100μl感受态加入0.01-1 μg质粒DNA(转化效率较高,第一次使用前最好做预实验确定所加质粒的量),用手快速、剧烈拨打管底混匀或用枪吹吸混匀,依次放于冰中静置5分钟、液氮5分钟、37℃水浴5分钟、冰浴5分钟。
3. 冰浴中拿出放室温,加入700μl 无抗生素的TY液体培养基,于28℃振荡培养2小时。

4. 6000 rpm 离心一分钟收菌,留取 100 μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的 TY平板上,倒置放于28℃培养箱培养2-3 天

 

● 农杆菌相关抗生素配方:

抗生素

配方

原液

工作液

羧苄青霉素

双蒸水溶解,0.22 μm滤膜过滤除菌

50 mg/ml

50 μg/ml

硫酸卡那霉素

双蒸水溶解,0.22 μm滤膜过滤除菌

50 mg/ml

50 μg/ml

链霉素

双蒸水溶解,0.22 μm滤膜过滤除菌

10 mg/ml

50 μg/ml

利福平

双蒸水溶解,0.22 μm滤膜过滤除菌

10 mg/ml

20 μg/ml

庆大霉素

双蒸水溶解,0.22 μm滤膜过滤除菌

20 mg/ml

40 μg/ml


常用农杆菌抗性:
 (R:抗;S:敏感。)

农杆菌

菌株

羧苄青霉素(carb)

链霉素

(strep)

利福平

(rif)

氯霉素(cam)

硫酸卡那霉素(kan)

Ar.A4

S

S

S

S

R

MSU440

S

R

S

S

S

Ar.Qual

S

R

S

R

S

C58C1

S

R

R

S

S

ATCC15834

S

S

S

S

S

K599

S

R

S

S

S

Ar.1193

R

R

R

S

S


● TY配方(1L):

Tryptone              5g

Yeast extract          3g     

补水到1L体积,完全溶解后,121度、20分钟高温灭菌

配制1M的氯化钙水溶液,121度、20分钟高温灭菌

每1L 灭菌的TY液体营养液中加入10ml 无菌的1M氯化钙水溶液即可。

若配制TY固体培养基,则加入15g 琼脂粉。


注意事项

1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10;质粒不纯或存在乙醇等有机物污染,转化效率急剧下降;质粒增大一倍,转化效率下降一个数量级。

2. 混匀质粒时应用手指快速拨打管底或用枪吹吸混匀,务必使质粒快速、均匀分散开,与感受态细胞充分接触。转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

3. 平板上阳性克隆密度过大时,由于营养不足,阳性克隆生长变慢,菌落变小,为了获得大的菌落,应减少质粒用量或降低涂板的菌量。

4.  C58C1具有链霉素、利福平抗性,不可用于具有链霉素抗性或利福平抗性质粒的转化。





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