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INVSc1

2017-9-24

INVSc1 Chemically Competent Cell

产品说明书 



产品规格 (CAT#: YC1050)

INVSc1 :                 100μl/支      保存: -80℃(3个月)

pYES2  :                      10μl       保存:-80℃(12个月)

Carrier DNA :             100μl       保存:-20℃(12个月)

PEG/LiAC:                   5ml        保存:    4℃(12个月) 


基因型

MATa his3Δ1 leu2 trp1-289 ura3-52/MATα his3Δ1 leu2 trp1-289 ura3-52 


产品说明

INVSc1菌株是专门用来做重组蛋白表达的宿主酵母,pYES2质粒与INVSc1酵母配套使用,激活pYES2质粒的GAL1启动子的转录进而启动下游重组蛋白的表达。INVSc1为合子型,可直接通过PEG/LiAc将pYES2质粒转化进入INVSc1细胞内。质粒pYES2的筛选标志为URA,可用SD-URA板进行筛选。INVSc1感受态细胞经特殊工艺制作,-80℃可保存三个月,pYES2质粒检测转化效率>104 cfu/μg DNA。

 

操作方法

1. 取100 µl冰上融化的INVSc1感受态细胞,依次加入预冷的目的质粒2-5 µg,Carrier DNA (95-100℃,5 min,快速冰浴,重复一次) 10 µl,PEG/LiAc 500 µl并吸打几次混匀,30℃水浴30 min (15 min时翻转6-8次混匀)。

2. 将管放42℃水浴15 min (7.5 min时翻转6-8次混匀)。

3. 5000 rpm离心 40 s弃上清,ddH2O 400 µl 重悬,离心 30s弃上清。

4. ddH2O 50 µl重悬,涂质粒筛选用:SD-U medium板,29℃培养48-96 h。


注意事项

1. 感受态细胞最好在冰上融化。

2. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

3. INVSc1酵母菌株对高温敏感,最适生长温度为27-30℃;高于31℃,生长速度和转化效率呈指数下降。




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